降膽固醇益生乳酸菌的篩選及其在大鼠體內的應用研究.pdf

1、隨著社會的進步，生活水平的不斷提高，人們膳食營養(yǎng)的攝入過量而引起的心腦血管疾病的發(fā)生率逐年上升，而誘發(fā)心腦血管疾病的主要因素之一是血清膽固醇水平超標，因此降低人體中膽固醇的含量對人類的健康至關重要。本課題研究的主要內容是對從內蒙古傳統(tǒng)乳制品中分離出的乳酸菌進一步篩選，綜合模擬人工胃腸液的耐受性、疏水性能力及去結合膽鹽能力等指標獲得一株降膽固醇功能較好的益生潛力菌株，研究其生物學特性及在大鼠體內的降膽固醇特性，為菌株的進一步開發(fā)應用奠定科

2、學的理論基礎。
　　 利用鄰苯二甲醛方法對4株供試乳酸菌在MRS-TRIO-OX-CHOL選擇性培養(yǎng)基（含100μg/mL膽固醇）厭氧條件下進行膽固醇去除率的測定，結果表明4株乳酸菌的膽固醇去除率在42.47％-58.32％之間，90-1菌株的膽固醇去除率最高。利用16S rDNA同源性分析的方法對4株乳酸菌進行鑒定，菌株90-1和L39-1為屎腸球菌，菌株L46-2為糞腸球菌，菌株L46-3為植物乳桿菌。
　　 模擬人

3、體胃腸道環(huán)境，測定菌株在酸性和高濃度膽鹽條件下的存活情況。結果表明4株菌具有較強的耐酸和耐膽鹽能力，完全可以通過胃進入腸道并保持很高的活菌數。在腸道環(huán)境中處理24h后活菌數都在4.7×107以上，屎腸球菌90-1表現出最強的耐受力。采用定性平板法測定菌株的膽鹽水解酶活性，均有白色的沉淀圈產生，說明這4株菌在生長過程中可能具有一定的膽鹽水解酶活力。同時對菌株的去結合膽鹽能力進行評價，菌株產膽酸量在2.43-3.35mM之間，其中屎腸球菌9

4、0-1產膽酸效力最高。綜合膽固醇去除率及三個篩選指標，屎腸球菌90-1作為降膽固醇潛力菌株綜合性能較好，可以作為目標菌株進行下一步研究。
　　 屎腸球菌90-1的生物學特性結果顯示，最適生長溫度為37℃，最適起始生長pH在5-7之間。測定生長曲線結果可知，菌株生長較為旺盛，2h進入對數期，12h后生長穩(wěn)定。對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和李斯特菌均有良好抑制作用。利用Kirby-Bauer紙片法選擇6種標準藥敏片對屎腸球菌90-1進

5、行藥敏試驗，結果表明該菌株對6種抗生素均沒有抗性。通過觀察血瓊脂平板上菌落周圍的溶血圈，判定屎腸球菌90-1沒有溶血作用。
　　 在體外研究的基礎上，對屎腸球菌90-1應用于大鼠體內，研究其在體內的降膽固醇特性。大鼠適應性喂養(yǎng)一周，設飼喂普通飼料的對照組A、飼喂高脂飼料的高脂組B和灌喂菌液組C。實驗28d，大鼠禁食14h采血，分離血清，檢測菌液對大鼠血清血脂四項的影響，對肝臟總膽固醇TC、糞便總膽固醇TC、糞便總膽酸TBA以及臟