降膽固醇乳酸菌的篩選、鑒定及降解機(jī)制的研究.pdf

1、目的：隨著生活水平的不斷提高,人們對食品營養(yǎng)的要求也越來越高,但隨之而來的負(fù)面影響卻是動脈粥樣硬化、冠心病、高血壓等心腦血管疾病的發(fā)病率不斷提高。國內(nèi)外大量臨床試驗(yàn)證實(shí),服用乳酸菌及其相關(guān)制品具有減少人體血清膽固醇含量,降低心血管疾病發(fā)病率的功效。本文通過篩選具有降膽固醇功能的乳酸菌株,并研究了它們的體外益生特性、體外降膽固醇機(jī)制和大鼠體內(nèi)降膽固醇功能療效,為推動功能性乳酸菌一降膽固醇乳酸菌的研究和應(yīng)用提供原始菌株和基礎(chǔ)研究支撐。

2、>　　 方法：全文以中國傳統(tǒng)食品泡菜、臘腸為材料,以碳酸鈣-MRS(calcium carbonate-Man Rogosa and Sharp Medium)選擇性培養(yǎng)基篩選乳酸菌,應(yīng)用改良的膽固醇培養(yǎng)基篩選具有較高降膽固醇能力的乳酸菌；結(jié)合菌落形態(tài)學(xué)、接觸酶反應(yīng)、革蘭氏染色、碳水化合物微量鑒定管及16SrRNA寡核苷酸堿基序列分析鑒定；研究其耐酸性,耐膽鹽活性,生長曲線及產(chǎn)酸特性；采用藥敏紙片法測定菌株對抗生素的敏感性,雙層瓊脂牛

3、津杯法測定菌株對常見致病菌的抑制效果；比較膽鹽存在與否、不同膽鹽成分對菌株在培養(yǎng)基中降膽固醇活性的影響；研究膽固醇在體外降解后,其在細(xì)菌沉淀、胞內(nèi)和胞外的分布情況,探討菌株體外降膽固醇的機(jī)制；構(gòu)建高脂血癥大鼠模型,測定灌胃菌株前后大鼠血清主要指標(biāo)的含量變化,研究降膽固醇乳酸菌在體內(nèi)的降膽固醇活性。
　　 結(jié)果：篩選得到的兩個(gè)菌株LpT1和LpT2其降解率分別達(dá)到49.11％和50.03％,經(jīng)鑒定為植物乳桿菌；同時(shí),植物乳桿菌Lp

4、T1和LpT2都呈現(xiàn)了較強(qiáng)的耐酸性耐膽鹽活性,在pH3.0條件下存活率都比較高,在含0.3％膽鹽的培養(yǎng)基中兩株菌的生長都受到了一定抑制；其中植物乳桿菌LpT1在pH3.0培養(yǎng)基中能至少存活8 h,在含0.1％膽鹽的培養(yǎng)基中能存活至少8 h；植物乳桿菌LpT2在pH2.0的培養(yǎng)基中至少能存活6 h,在含0.1％膽鹽的培養(yǎng)基中都能存活至少8h；植物乳桿菌LpT1在第14小時(shí)開始進(jìn)入對數(shù)生長期,在第22小時(shí)進(jìn)入生長穩(wěn)定期,生長30 h后最低p

5、H值4.2左右；植物乳桿菌LpT2在第12小時(shí)進(jìn)入對數(shù)生長曲線,第20小時(shí)進(jìn)入穩(wěn)定期,生長30 h后者最低pH值在4.0左右；植物乳桿菌LpT1和LpT2對18種抗生素都比較敏感,抑菌圈基本都在20 mm以上；它們的發(fā)酵上清液對沙門氏菌、銅綠假單孢菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制效果都比較明顯。
　　 植物乳桿菌LpT1和LpT2在含有結(jié)合型膽鹽?；悄懰徕c培養(yǎng)基中的降解膽固醇的活性與未含有?；悄懰徕c培養(yǎng)基中的降

6、膽固醇活性沒有顯著差異；植物乳桿菌LpT2在含有牛膽鹽與未含有牛膽鹽培養(yǎng)基中降膽固醇的活性存在顯著差異,而植物乳桿菌LpT1沒有顯著差異；飼喂高脂飼料7 d后,成功構(gòu)建出高脂血癥大鼠模型；灌胃菌株LpT14周后,大鼠血清中總膽固醇含量下降極顯著(p<0.01),甘油三脂下降顯著(p<0.05),高密度脂蛋白膽固醇幾乎沒有變化,低密度脂蛋白膽固醇含量下降比較顯著(p<0.05),動脈硬化指數(shù)明顯下降,HDL-C/TC的比值明顯升高；灌胃植

7、物乳桿菌LpT24 w后,大鼠血清中總膽固醇的含量明顯下降(p<0.05),低密度脂蛋白膽固醇也下降比較顯著(p<0.05),甘油三脂出現(xiàn)下降但不顯著,高密度脂蛋白膽固醇出現(xiàn)下降；灌胃植物乳桿菌和陽性藥物的大鼠體重增加率明顯低于灌胃蒸餾水的大鼠體重增加率。
　　 結(jié)論：篩選得到的植物乳桿菌LpT1和LpT2在體外具有較高的降膽固醇活性,在體內(nèi)對高脂血癥大鼠也具有一定的療效,同時(shí)能減緩大鼠對高脂飼料的利用率,緩解體重的增加率；另外