發(fā)酵腸優(yōu)質(zhì)乳酸菌的分離、篩選與鑒定.pdf

1、發(fā)酵腸具有色香濃郁、風(fēng)味獨(dú)特、易消化吸收的特點(diǎn)，在各國(guó)家廣泛流行。發(fā)酵腸菌種的選育是發(fā)酵腸的核心技術(shù)。本研究擬分離篩選出具有良好的發(fā)酵特性和工藝耐受性的微生物菌種，為發(fā)酵腸的開(kāi)發(fā)儲(chǔ)備新的菌種資源。
　　本研究所得的主要結(jié)果如下:
　　(1)本研究為了得到優(yōu)良的發(fā)酵腸菌株，利用溶鈣圈的方法，從10種來(lái)自國(guó)內(nèi)外傳統(tǒng)發(fā)酵腸樣品中分離得到76種菌株;
　　(2)再通過(guò)革蘭氏染色試驗(yàn)、過(guò)氧化氫酶檢測(cè)試驗(yàn)、產(chǎn)黏試驗(yàn)、產(chǎn)氨試驗(yàn)、紙層

2、析分析試驗(yàn)和抑菌試驗(yàn)的篩選之后得到8株菌株，分別為1-3、1-7、2-2、2-9、4-1、6-5、7-3、9-8;
　　(3)乳酸菌具有較強(qiáng)的產(chǎn)酸能力。在發(fā)酵過(guò)程中，其生長(zhǎng)性能和產(chǎn)酸能力起著非常重要的作用。在配料之后接入乳酸菌，在經(jīng)歷盡可能短暫的停滯期之后，乳酸菌會(huì)很快進(jìn)入迅速增殖、快速產(chǎn)乳酸的時(shí)期，進(jìn)而抑制一些不耐酸的有害微生物的生長(zhǎng)，從而可以減少致病菌和腐敗菌的危害。本研究所篩選得到菌株1-7、4-1、6-5、7-3均能快速生

3、長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生乳酸，且產(chǎn)酸能力較強(qiáng)形成。在培養(yǎng)12h之后，培養(yǎng)液的pH值可由起始的pH=6.35降至pH=4.00左右。通過(guò)對(duì)菌株進(jìn)行生長(zhǎng)性能和產(chǎn)酸特性的研究之后，選擇生長(zhǎng)情況良好、產(chǎn)酸迅速的這四株菌株作為后續(xù)研究菌株。
　　(4)通過(guò)耐受試驗(yàn)和蛋白酶活性的檢測(cè)試驗(yàn)，最后得到一株特性優(yōu)良的菌株7-3。該菌株在生長(zhǎng)發(fā)酵過(guò)程中具有較高的蛋白酶活性，并且能在添加了150 mg/kgNaNO2和6g/dLNaCl的MRS培養(yǎng)基中快速生長(zhǎng)繁殖

4、。
　　(5)對(duì)該菌株7-3進(jìn)行菌落形態(tài)觀察和菌體形態(tài)觀察，其菌落形態(tài)呈圓形，邊緣較整齊且濕潤(rùn)粘稠，表面光滑，半透明，不產(chǎn)生色素;經(jīng)過(guò)革蘭氏染色后，在油鏡下觀察，革蘭氏染色呈陽(yáng)性，菌體為長(zhǎng)桿狀。在經(jīng)過(guò)查閱大量文獻(xiàn)和參考《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》和《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》，對(duì)經(jīng)過(guò)大量的試驗(yàn)篩選出來(lái)的菌株7-3進(jìn)行一系列的生理生化鑒定試驗(yàn)和參照比對(duì)。最終得出結(jié)論:試驗(yàn)菌株革蘭氏染色為陽(yáng)性，再結(jié)合其菌落、菌體形態(tài)特征以及生理生化特征，可初步鑒

5、定7-3為彎曲乳桿菌（Lactobacillus curvatus）。
　　(6)經(jīng)過(guò)提取得到供試菌株7-3的DNA基因組，用細(xì)菌的16S rDNA通用引物對(duì)該功能菌株的DNA基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增及純化，通過(guò)測(cè)定純化后的PCR產(chǎn)物序列，得到了供試菌株的16SrDNA序列。將菌株7-3和一些相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行相似度比較，結(jié)果與彎曲乳桿菌（Lactobacillus curvatus）的同源相似度最高，為99.71％。將該菌株7-3的菌