產(chǎn)CLA乳酸菌的篩選鑒定及LAI酶動力學(xué)研究.pdf

1、本試驗圍繞如何開發(fā)有保健功能的乳酸菌，以自家釀制的酸菜汁為試驗原料，以傳統(tǒng)分離細菌的方法，通過革蘭氏染色初步鑒定后，通過 PCR擴增16SrDNA片段并將之與T-載體連接轉(zhuǎn)化后序列分析，確定菌種，結(jié)果表明該菌種為棒狀乳桿菌，通過紫外法分析可知其產(chǎn)生的共軛亞油酸的含量0.0107mg/ml，共軛亞油酸轉(zhuǎn)化率為2.51％。
　　首先通過50%飽和硫酸銨對棒狀乳桿菌亞油酸異構(gòu)酶進行分離純化，其回收率為65.57%，純化倍數(shù)為1.15，再

2、經(jīng)80%飽和硫酸銨鹽析其回收率為44.62%，純化倍數(shù)為3.73，最后經(jīng)過Sephadex G-100凝膠過濾層析亞油酸異構(gòu)酶的回收率為10.32%，純化倍數(shù)為8.36。
　　對產(chǎn)共軛亞油酸棒狀乳桿菌從培養(yǎng)溫度，培養(yǎng)時間，pH值和接種量四個因素方面進行單因素實驗，確定棒狀乳桿菌產(chǎn)共軛亞油酸最佳培養(yǎng)溫度為36℃，最佳培養(yǎng)時間為36h，最佳pH值為5，最佳接種量為4%；設(shè)計四因素三水平正交試驗確定棒狀乳桿菌產(chǎn)共軛亞油酸的最優(yōu)組合為培養(yǎng)