乳酸菌活菌制劑保護(hù)劑及其工藝的研究.pdf

1、本文研究了嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus，簡(jiǎn)稱LA)，嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus，簡(jiǎn)稱ST)，真空冷凍干燥制備菌粉及活菌制劑的工藝條件，重點(diǎn)對(duì)制備過程中在不同工藝流程添加的保護(hù)劑進(jìn)行了研究。
　　研究了2個(gè)菌株（種）的生長(zhǎng)、繁殖和代謝規(guī)律，為制備活菌制劑打下基礎(chǔ)。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的pH值、滴定酸度和菌落總數(shù)對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，測(cè)定2個(gè)菌株（種）的生長(zhǎng)曲線。綜合

2、分析各生長(zhǎng)曲線，確定嗜酸乳桿菌在5％接種量，37℃下最佳收獲期為12～16h;嗜熱鏈球菌在5％接種量，42℃下最佳收獲期為16～20h。用無菌的乳酸溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的初始pH值分別為5.6、5.8和6.0，不同溫度下培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)嗜酸乳桿菌的最佳培養(yǎng)條件:初始pH值5.8，37℃培養(yǎng);嗜熱鏈球菌的最佳培養(yǎng)條件:初始pH值5.6，42℃培養(yǎng)。選擇4種天然廉價(jià)物料（添加劑）作為2個(gè)菌株（種）的促生因子，發(fā)現(xiàn)對(duì)其生長(zhǎng)均有促進(jìn)作用，影響大小依次為:西

3、紅柿汁5％＞香菇汁3％＞胡蘿卜汁5％＞啤酒5％＞對(duì)照(LA);啤酒5％＞西紅柿汁5％＞香菇汁3％＞胡蘿卜汁5％＞對(duì)照(ST)。
　　在此基礎(chǔ)上分別對(duì)2個(gè)菌株（種）凍干菌粉的工藝進(jìn)行了研究。2個(gè)菌株（種）活菌計(jì)數(shù)均選擇改良TJA固體培養(yǎng)基及雙層平板法進(jìn)行，測(cè)得的活菌數(shù)最大;離心條件均選擇10min，7000 rad/min;冷凍干燥保護(hù)劑均選擇脫脂奶粉10％+乳糖6％。冷凍后對(duì)凍干菌粉分別進(jìn)行檢定結(jié)果如下：鏡檢革蘭氏陽性無雜菌，凍干

4、菌粉含水率≤3％，活菌存活率LA為69.33％，ST為73.59％。
　　對(duì)嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌活菌制劑的工藝進(jìn)行了研究。為提高2個(gè)菌株（種）活菌制劑的活菌存活率，提高片劑質(zhì)量，延長(zhǎng)有效期，分別選擇2個(gè)菌株（種）在制備過程中的不同工藝流程加入保護(hù)劑，并對(duì)保護(hù)劑配方進(jìn)行優(yōu)化。首先利用Plackett-Burman(PB)設(shè)計(jì)法，篩選出嗜酸乳桿菌在發(fā)酵培養(yǎng)及制劑壓片2個(gè)工藝流程中分別加入保護(hù)劑時(shí)，影響其活菌存活率的重要因素;接著利用

5、均勻設(shè)計(jì)法對(duì)篩選出的重要因素的最優(yōu)水平進(jìn)行確定。在利用PB法相關(guān)公式計(jì)算并篩選出重要因素的基礎(chǔ)上，利用DPS軟件對(duì)均勻設(shè)計(jì)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多項(xiàng)式逐步回歸，進(jìn)一步得到含有重要因素的回歸方程，求y的極值與相應(yīng)各個(gè)因素的對(duì)應(yīng)值，從而確定各因素的最優(yōu)水平，得到保護(hù)劑的配方。嗜熱鏈球菌保護(hù)劑配方確定方法同上。共得到4組保護(hù)劑的配方，LA發(fā)酵培養(yǎng)保護(hù)劑:當(dāng)氯化鈉0.3％，甘露醇0.4％，麥芽糖3.5％時(shí)，活菌存活率y1max=93.1695％; LA制

6、劑壓片保護(hù)劑:當(dāng)抗壞血酸1.0％，蔗糖37.0％時(shí)，活菌存活率y2max=97.0612％;ST發(fā)酵培養(yǎng)保護(hù)劑:當(dāng)蔗糖0.5％，可溶性淀粉3.5％時(shí)，活菌存活率y1'max=94.5862％; ST制劑壓片保護(hù)劑:當(dāng)聚乙烯吡咯烷酮12.0％，可溶性淀粉25.0％，硫代硫酸鈉4.5％，麥芽糖2.5％時(shí)，活菌存活率y2'max=97.8468％。對(duì)優(yōu)化得到的4組保護(hù)劑配方進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。結(jié)果證明優(yōu)化確定的保護(hù)劑配方有效的提高了2個(gè)菌株（種）活