人源可溶性B淋巴細胞刺激因子（hsBAFF）對小鼠特異性免疫細胞的免疫調(diào)節(jié)作用及其機理研究.pdf

1、本文運用細胞培養(yǎng)、流式細胞分析、激光共聚焦顯微鏡分析等免疫學(xué)和細胞學(xué)技術(shù)，綜合研究和觀察了hsBAFF對小鼠B淋巴細胞的免疫功能活性及其胞內(nèi)Ca<'2+>信號變化，T淋巴細胞亞群分布和NK細胞活性影響，探討了hsBAFF對機體特異性免疫細胞乃至整體免疫系統(tǒng)的調(diào)控作用及其作用機制。結(jié)果如下： 1 hsBAFF注射小鼠體重和血液18項常規(guī)指標變化 選用48只健康ICR小鼠，雌雄各半，隨機分為對照組和5個不同劑量的hsBAF

2、F處理組，處理組分別每日腹腔注射含hsBAFF 0.01、0.1、0.5、l、2 mg／kg體重的PBS溶液，對照組注射同等劑量的PBS溶液。每天對各組小鼠稱重，分別在第4、8天測定小鼠血液18項常規(guī)指標。結(jié)果表明：在整個實驗期間，小鼠體重均隨日齡而增加，各組問無顯著差異；各組血液1 8項常規(guī)指標沒有顯著變化，只在第4天時個別指標有波動，但均在生理正常允許范圍內(nèi)。提示：hsBAFF對小鼠的正常生理指標無明顯影響，表明其對機體沒有明顯的毒

3、害作用，為hsBAFF進入臨床階段的研究提供了毒理學(xué)證據(jù)。 2 hsBAFF注射小鼠脾臟B淋巴細胞活性和血漿IgM、IgA、IgG含量變化研究 選用40只健康ICR小鼠，雌雄各半，隨機分成1個對照組和3個不同劑量的hsBAFF處理組，每組10只。處理組每日腹腔注射含hsBAFF 0.1、0.5和1mg／kg體重的PBS溶液，對照組注射同等劑量的PBS溶液。分別在第4、8天檢測脾臟B淋巴細胞的增殖活性和對12S免疫反應(yīng)

4、以及血清IgM、IgA、IgG的含量變化。結(jié)果表明：1asBAFF注射組小鼠脾臟B淋巴細胞的自然增殖活性顯著升高并呈劑量效應(yīng)關(guān)系，在實驗第8天B淋巴細胞對L,PS的刺激增殖活性明顯上升；注射第4、8天時，hsBAFF注射組小鼠血清IgM含量升高近兩倍，IgA含量也有顯著升高。血清IgG含量在實驗第4天與對照組相當，但第8天時O.5-1.0 mg／kghsBAFF注射組明顯高于對照組。提示：hsBAFF可以通過提高B淋巴細胞的增殖活性和免

5、疫反應(yīng)及增加血清IgM，IgA和IgG的含量增強機體的免疫反應(yīng)。 3 hsBAFF注射對小鼠脾臟cD<'4+>和CD8<'+>T淋巴細胞及NK細胞活性調(diào)節(jié)作用研究 選用40只健康ICR小鼠，雌雄各半，隨機分成1個對照組和4個hsBAFF處理組，每組8只。HsBAFF處理組分別每日腹腔注射hsBAFF(0.01、O.1、0.5和2 mg／kg體重)的PBS溶液，對照組注射同等劑量的PBS溶液。實驗第8天時，檢測脾臟CD

6、4<'+>和CD8<'+>T淋巴細胞亞群分布及NK細胞活性。結(jié)果表明：小鼠脾臟CD4<'+>T細胞百分比隨劑量的升高而增高，其中O.5和2 mg/kg注射組比對照組顯著增高(p<0.05，p<0.001)。而各組的CD8<'+>T細胞百分比相近。CD4<'+>/CD8<'+>T細胞比值也隨劑量而升高；0.5和2 mg/kg注射組小鼠脾臟NK細胞活性顯著高于對照組(p<0.05)。提示:hsBAFF可以通過增加脾臟CD4<'+>T淋巴細胞

7、的功能以及上調(diào)NK細胞的活性提高機體的免疫反應(yīng)。 4 hsBAFF注射小鼠脾臟B淋巴細胞[Ca<'2+>]<,i>變化探討 選用8只健康ICR小鼠，雌雄各半，隨機分對照組和hsBAFF注射組。每日腹腔注射，hsBAFF注射劑量為0.1mg/kg體重，對照組注射同等劑量的PBS溶液，連續(xù)8天。用單抗B220標記以顯示B淋巴細胞，再以熒光探針Fluo-3/AM負載，然后通過激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)分析B淋巴細胞[