豬源乳酸菌的分離及其對豬瘟疫苗免疫協(xié)同作用的研究.pdf

1、本研究從健康仔豬腸道和糞便中分離鑒定了9株乳酸菌。同時對分離的乳酸菌進行耐酸耐膽鹽試驗，篩選出適合于腸道微生態(tài)環(huán)境中生存的優(yōu)良乳酸菌兩株，并對其進行了培養(yǎng)基優(yōu)化和冷凍干燥保護劑配方優(yōu)化，最后對其進行冷凍干燥，做成凍干菌粉，添加到飼料飼喂仔豬，測定其對豬瘟疫苗的免疫調節(jié)作用。結果表明: 通過對分離的乳酸菌菌落形態(tài)、染色特性及API500HL乳酸菌系統(tǒng)鑒定試劑盒，鑒定出1株嗜糞乳桿菌，1株唾液乳桿菌，1株植物乳桿菌，2株嗜酸乳桿菌，

2、2株發(fā)酵乳桿菌，1株糞腸球菌，1株乳酸乳球菌。通過耐膽鹽耐酸試驗，篩選出適合于腸道微生態(tài)環(huán)境中生存的優(yōu)良乳酸桿菌和球菌各一株。分別為:L6植物乳桿菌和E1糞腸球菌。其中L6植物乳酸桿菌耐膽鹽耐酸能力強，其耐酸能力能達到90.49％，耐膽鹽能力為87.02％；E1糞腸球菌的耐膽鹽耐酸能力稍弱，耐酸能力為86.73％，耐膽鹽能力為66.52％。 以乳酸菌增菌培養(yǎng)基MRS培養(yǎng)基的營養(yǎng)組成為依據(jù)，選擇氮源(A)、碳源(B)、生長因子(C

3、)和緩沖鹽類(D)為試驗因素，設計了正交試驗，獲取培養(yǎng)基的最佳組成。對L6植物乳桿菌具有良好增菌效果的培養(yǎng)基配方為:胰蛋白胨0.5％，乳糖1％，酵母浸粉0.5％，pH值6.4～6.8，其菌落總數(shù)可達到3.65×1012cfu/ml。對E1糞腸球菌具有良好增菌效果的培養(yǎng)基配方為:魚肉蛋白胨0.5％，蔗糖1％，酵母浸粉0.5％，pH值6.4～6.8，其菌落總數(shù)可達到5.61×1012cfu/ml。 保護劑對提高凍干過程中兩株菌的存活

4、率具有明顯效果，其中最好的保護劑為脫脂奶粉10％，谷氨酸鈉1.5％，L-半胱氨酸0-5％，乳糖2％，糊精10％。兩株菌的存活率分別可以達到91.6％和81.4％。 仔豬飼喂含植物乳酸桿菌和糞腸球菌凍干粉后第10天測豬群豬瘟抗體效價，除0.5％L6植物乳酸桿菌和0.3％E1糞腸球菌添加量組與對照組差異極顯著(p<0.01)外其他組與對照組之間均無明顯差異。而飼喂30天后添加不同菌種的各試驗組與對照組差異都極顯著(p<0.01)。而