嗜酸氧化亞鐵硫桿菌ATCC 23270硫氧化相關周質(zhì)空間蛋白的研究.pdf

1、嗜酸氧化亞鐵硫桿菌是目前使用最廣泛，研究最深入的浸礦微生物。它是革蘭氏陰性、化能自養(yǎng)菌，能通過氧化Fe2+、各種還原性硫化物以及H2提供生長能量。A。ferrooxidans對硫的氧化利用過程十分錯綜復雜，包括硫的活化，轉(zhuǎn)運和硫的氧化，其中硫氧化過程主要發(fā)生在細胞周質(zhì)空間內(nèi)。但由于相關研究的缺乏，A.ferrooxidans中的硫氧化活化過程機制仍不清楚。為了進一步研究硫及硫化礦氧化中起作用的蛋白質(zhì)，本文通過構(gòu)建嗜酸氧化亞鐵硫桿菌在不同

2、能源基質(zhì)中生長時的周質(zhì)蛋白表達圖譜，從差異蛋白質(zhì)組學角度探討硫氧化相關周質(zhì)空間蛋白的表達情況并對其進行鑒定和特性分析，為浸礦微生物硫氧化機理的研究提供一些依據(jù)。 本研究通過滲透休克法提取嗜酸氧化亞鐵硫桿菌的周質(zhì)空間蛋白質(zhì)，并采用雙向電泳的方法，對不同培養(yǎng)條件下（單質(zhì)硫和Fe2+為營養(yǎng)源）A.ferrooxidans周質(zhì)相關蛋白差異表達譜進行了研究。采用雙向電泳的方法分離周質(zhì)蛋白，進行多次重復試驗和條件摸索，并結(jié)合胞外和外膜蛋白圖

3、譜確定是否含有其他特化空間污染，最終獲得重復性良好的周質(zhì)蛋白雙向電泳圖。雙向電泳結(jié)果經(jīng)軟件分析后鑒定出17個在硫中生長時表達明顯上調(diào)的蛋白，結(jié)合基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF/MS）對所得17個在元素硫為基質(zhì)培養(yǎng)時高量表達的蛋白質(zhì)進行鑒定，共獲得17個蛋白質(zhì)斑點的肽質(zhì)量指紋圖譜，根據(jù)SwissPort，數(shù)據(jù)庫和特有的AFE-3217數(shù)據(jù)庫，得到了編碼蛋白的相關基因信息，并對其進行了功能分類。本研究同時通過實時定量