擬南芥中一個功能獲得性脅迫抗性突變體的篩選與分析.pdf

1、植物激素ABA在植物生命活動中起著多種重要作用，它能通過調控細胞內復雜的代謝過程參與植物對干旱、鹽堿和冷害等多種脅迫環(huán)境的應答。同時，ABA在植物發(fā)育過程中也起著非常重要的作用，包括種子貯存蛋白和脂類的合成，提高種子抗旱性，調控休眠和萌發(fā)過程以及植株再生等。
　　 本試驗研究主要材料的最初來源是雌二醇誘導時獲得的功能獲得性甘露醇不敏感突變體。遺傳學分析結果顯示該突變體的表型能夠穩(wěn)定遺傳。我們將之命名為gar16，并用TAIL-P

2、CR的方法進行了基因克隆。BLAST比對及分析結果顯示T-DNA插入到GAR16基因的啟動子區(qū)。GAR16基因屬于CYP450超家族，編碼一個鐵依賴型單加氧酶。半定量RT-PCR分析顯示：與野生型相比，突變體中GAR16基因幾乎沒有表達，而在經(jīng)雌二醇誘導后，該基因的表達量得到明顯提高，甚至是野生型的幾倍。在進一步的實驗中我們發(fā)現(xiàn)，以子葉發(fā)生率為標準，經(jīng)誘導后該突變體對各種濃度的NaCl、ABA脅迫都表現(xiàn)出了一定程度的抗性，即基因超表達植

3、株的子葉發(fā)生率遠大于野生型的子葉發(fā)生率。而在甘露醇、NaCl、ABA、赤霉素抑制劑、水楊酸等脅迫下，無論雌二醇誘導與否，突變體和野生型的萌發(fā)率并沒有明顯差別，說明該基因對植物的調控是在萌發(fā)后期起作用的。通過根伸長實驗我們發(fā)現(xiàn)，ABA和過氧化氫對GAR16基因超表達植株的主根抑制程度遠遠大于野生型，暗示GAR16基因可能參與了過氧化氫應答ABA調控擬南芥根形態(tài)發(fā)育的過程。我們對ABA處理后相關基因表達量的RT-PCR分析結果表明：GAR1