外消旋布洛芬酶法拆分的研究.pdf

1、福建師范大學(xué)碩士學(xué)位論文外消旋布洛芬酶法拆分的研究姓名：郭華穎申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：唐良華許旭萍20080401摘要摘要論文以有機(jī)介質(zhì)中脂肪酶催化(R，S)一布洛芬的高選擇性拆分為目標(biāo)，開展了有關(guān)方面的研究：首先，確立了HPLC拆分(R，S)一布洛芬兩個對映體及布洛芬酯的方法，并通過篩選得到一株高選擇性拆分消旋布洛芬的脂肪酶產(chǎn)生菌一&n記舭肌expansumTS414。其次，研究游離脂肪酶催化布洛芬不對稱

2、酯化反應(yīng)過程中，水分含量、有機(jī)溶劑、底物醇種類及濃度、酶粉與水分的比例、反應(yīng)溫度等條件對拆分效果的影響，確立的最佳反應(yīng)體系為：異辛烷15mL，布洛芬646mmol／L，脂肪酶533g／t，酶量：水量=10：1，正丙醇40mmol／L，含水量05％，60℃反應(yīng)50h。在此條件下，拆分反應(yīng)的底物轉(zhuǎn)化率和底物選擇率分別為42％、42963。然后，確立了PenicilliumexpansumTS414脂肪酶的固定化的最佳條件：AB8大孔樹脂作為

3、吸附載體，酶與樹脂比例為6：1、緩沖液pH值為9O、吸附6h、凍干2h；運用均勻?qū)嶒瀮?yōu)化了布洛芬、醇濃度和固定化酶的最佳用量：15mL異辛烷體系中，布洛芬2084mg，正丙醇4226uL，固定化酶06g，在搖床轉(zhuǎn)速和反應(yīng)溫度分別為200rpm和40℃時，ee。的預(yù)測值為7545％。通過驗證實驗，得到ee。的實驗值為8112％。在此條件下，拆分反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率和對映體選擇率E值分別為4815％和66135；固定化酶對消旋布洛芬拆分的效果較為理

4、想。最后，研究并確定了固定化PenicilliumexpansumTS414脂肪酶催化(R，S)一布洛芬酯化拆分的動力學(xué)方程。利用origin75軟件對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性擬合，得到了PenicilliumexpansumTS414脂肪酶催化酯化反應(yīng)的動力學(xué)常數(shù)：Vmax=111173mmol／hL，KA=464111mmol／L，KB=025143mmol／L，Kia=18231537mmol／L。關(guān)鍵詞布洛芬，脂肪酶，HPLC，拆分，