加壓溶劑法提取紅三葉草異黃酮及其單體分離研究.pdf

1、紅三葉草(Trifolium Pratense.L)為豆科三葉草屬多年生牧草，含有豐富的異黃酮類(lèi)化合物，其中芒柄花黃素和雞豆黃素含量相對(duì)較高。紅三葉草異黃酮具有消炎、抗癌、抗腫瘤、調(diào)節(jié)人體激素平衡等多種生理作用。芒柄花黃素和雞豆黃素還是制備大豆異黃酮苷元的重要原料。本試驗(yàn)以紅三葉草為原料，研究了紅三葉草異黃酮的提取純化、單體分離和抗氧化的生物活性。
　　 研究了加壓溶劑法和亞臨界水法提取紅三葉草總異黃酮，并對(duì)兩種方法進(jìn)行比較分析

2、。通過(guò)單因素及正交試驗(yàn)確定加壓溶劑法提取紅三葉草總異黃酮的最佳工藝條件為:提取溫度125℃、提取時(shí)間5min、提取壓力1.6MPa、液固比25ml/g，乙醇濃度70％，紅三葉草總異黃酮最終粗得率為49.58mg·g-1。通過(guò)單因素及正交試驗(yàn)確定亞臨界水法提取紅三葉草總異黃酮的最佳工藝條件為:提取溫度120℃、提取時(shí)間15min、提取壓力1.4MPa、液固比50ml/g，紅三葉草總異黃酮最終粗得率為33.61 mg·g-1。研究結(jié)果表明加

3、壓溶劑法提取率高于亞臨界水法。
　　 研究了大孔樹(shù)脂法純化紅三葉草總異黃酮的方法。通過(guò)靜態(tài)吸附與解析試驗(yàn)研究了5種大孔吸附樹(shù)脂的吸附效果，結(jié)果表明AB-8對(duì)紅三葉草總異黃酮的綜合性吸附效果最好。選取70％濃度乙醇作為洗脫液，用AB-8大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行動(dòng)態(tài)試驗(yàn)，得到最佳純化條件為:選擇上樣液濃度為0.2173mg/mL，樣液體積為3BV，進(jìn)樣流速為1mL/min，洗脫液體積為2BV，洗脫流速為2mL/min，在以上條件下異黃酮回收

4、率為96.61％，大孔樹(shù)脂純化前黃酮粗提液純度為5.03％，純化后樣品純度為65.58％。
　　 應(yīng)用高速逆流色譜法對(duì)經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂純化的紅三葉草異黃酮進(jìn)行再次純化，分離出芒柄花黃素和雞豆黃素，確定最佳溶劑體系為:正己烷:氯仿:甲醇:水=1.5∶3∶3∶2; HSCCC分離操作參數(shù):主機(jī)溫度為30℃，主機(jī)轉(zhuǎn)速為900 r/min，流動(dòng)相流速為2 mL/min，樣品濃度5.26mg/mL。在上述條件下得到的芒柄花黃素和雞豆黃素的純度