Ⅰ型膠原的提取及其組裝和表征.pdf

1、膠原蛋白，簡(jiǎn)稱膠原，是細(xì)胞外基質(zhì)的主要結(jié)構(gòu)蛋白，是結(jié)締組織的主要成份之一。它廣泛存在于動(dòng)物的皮、骨、肌腱、韌帶、血管中，約占哺乳動(dòng)物總蛋白的1/3。膠原蛋白以其良好的生物相容性、生物可降解性和弱抗原性，在藥物釋放和組織工程領(lǐng)域得到了廣泛地應(yīng)用。 本文是以不同種屬的動(dòng)物皮膚為基本原料，通過(guò)酸溶法-醋酸萃取提取了鯊魚(Carcharodoncarcharias)、牛蛙(Rana catesbeiana)、鵪鶉(Coturnix co

2、turnix)、青魚(Potamalosa richmondia)四種動(dòng)物的I型膠原。用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析提取的膠原，與標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白比較得到：這四種膠原的肽鏈組成均為α<,1>(I)<,2>α<,2>(I)，與I型膠原的肽鏈組成相一致；分別測(cè)量提取的膠原的特征吸收峰，結(jié)果顯示：這四種膠原的最高吸收峰均在225±5nm，與文獻(xiàn)報(bào)道的膠原的特征吸收峰位置相符。用考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定四種膠原的濃度，結(jié)果顯示：鯊魚皮膚膠原的提取率

3、相對(duì)最高，鵪鶉皮膚膠原的提取率相對(duì)最低。 以這四種膠原提取液為母液，使用真空冷凍干燥法，得到相應(yīng)的膠原海綿。這四種膠原海綿外觀相似，色澤白或微黃，質(zhì)地均勻，結(jié)構(gòu)較為疏松，肉眼可見許多大小不一的孔隙；進(jìn)一步對(duì)其含水量、潤(rùn)濕時(shí)間、吸水量、吸水率等物理性能進(jìn)行測(cè)定，數(shù)據(jù)表明膠原海綿親水性好，吸水率較大。用紫外燈照射鯊魚膠原海綿，促使其膠原分子中酪氨酸和苯丙氨酸的交聯(lián)，得到的膠原支架材料呈現(xiàn)立體的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。 設(shè)計(jì)使用透析法制備

4、了膠原水凝膠膜，即對(duì)飽和的鯊魚、牛蛙膠原提取液，通過(guò)透析、載玻片壓平制備成膠原水凝膠膜。與電紡絲法制備納米級(jí)膠原膜相比，此方法簡(jiǎn)便易行，無(wú)需復(fù)雜的儀器設(shè)備。螺旋測(cè)微器測(cè)量膠原水凝膠膜的厚度，在飽和狀態(tài)下得到的鯊魚膠原水凝膠膜為0.210±0.040mm、牛蛙膠原水凝膠膜為0.070±0.015 mm。對(duì)鯊魚膠原水凝膠膜進(jìn)行SEM和AFM表征，從SEM圖像中能夠清楚地看到膠原纖維，彼此緊密交聯(lián)，每根膠原纖維由相互纏繞的三股螺旋形成；AFM