MICAL-1 CH結構域的折疊和結構穩(wěn)定性的初步研究.pdf

1、隨著人類基因組規(guī)?；瘻y序的結束，人們越來越關注蛋白質折疊問題。具有正確三級結構，對于蛋白質行使功能十分重要。錯誤折疊的蛋白質能形成一系列疾病，例如人類的一些淀粉狀纖維變性病。只有透徹地了解蛋白質折疊過程中的一系列基本事件，才有可能最終了解蛋白質空間結構與功能的關系。研究蛋白質折疊不僅具有重大的科學意義，更在醫(yī)學和生物工程領域具有極大的應用價值。本研究中選用了人MICAL-1 CH結構域為模型，主要采用核磁共振技術和天然態(tài)下氫氘交換相結合

2、的方法研究CH結構域的折疊特性。 MICAL-1 CH結構域有109個氨基酸，其三級結構由6個螺旋和一個3<,10>螺旋組成，整個分子形成了2個疏水核心。為了更全面深入地了解MICAL-1 CH結構域的折疊過程，除了應用核磁共振和自然態(tài)下氫氘交換相結合的方法，還使用了一些常規(guī)的光譜學方法，如熒光光譜(fluorescence)、圓二色譜(CD)對蛋白質折疊進行了研究。 首先用蛋白質內源熒光光譜和CD光譜研究了鹽酸胍(

3、GdmCl)誘導的MICAL-1 CH結構域去折疊過程的熱力學。發(fā)現(xiàn)MICAL-1 CH結構域的變性主要發(fā)生在2-4 M GdmCl范圍內，蛋白變性的Cm值大約為2.5 M GdmCl。蛋白質去折疊的自由能是7.11±0.58 kcal mol<'-1>，結構對鹽酸胍的敏感度m大小為2.82±0.23 kcal mol<'-1>M<'-1>。 以此為根據(jù)，進行了變性劑濃度在0-1.4 M GdmCl范圍內的自然態(tài)下氫氘交換實驗