人工神經(jīng)納米纖維支架材料體外篩選的研究.pdf

1、第一部分:雪旺細(xì)胞株的體外培養(yǎng)與鑒定
　　 目的:對(duì)體外培養(yǎng)的雪旺細(xì)胞株進(jìn)行包括細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)規(guī)律、純度和基因表型進(jìn)行觀察和檢測(cè),比較其與正常雪旺細(xì)胞的差異,鑒定其是否可應(yīng)用于人工神經(jīng)納米纖維支架材料的體外篩選。
　　 方法:取雪旺細(xì)胞株RSC96常規(guī)進(jìn)行傳代培養(yǎng),觀察細(xì)胞的形態(tài)變化和生長(zhǎng)規(guī)律;針對(duì)雪旺細(xì)胞特異性標(biāo)志物S-100抗原進(jìn)行免疫熒光染色,顯微鏡下觀察S-100陽(yáng)性率以確定雪旺細(xì)胞純度;采用RT-PCR對(duì)雪旺細(xì)

2、胞株S-100、GDNF、BDNF、NGF、CNTF、PMP22等重要基因表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè),確定其表達(dá)陽(yáng)性情況。
　　 結(jié)果:雪旺細(xì)胞株在傳代后36小時(shí),具有典型雪旺細(xì)胞形態(tài),且生長(zhǎng)規(guī)律與正常雪旺細(xì)胞相似,但時(shí)間縮短;S-100免疫熒光染色,所有細(xì)胞均S-100抗原表達(dá)陽(yáng)性,純度達(dá)100％,且S-100抗原在細(xì)胞內(nèi)分布規(guī)律與正常雪旺細(xì)胞相同;RT-PCR檢測(cè)雪旺細(xì)胞株S-100、GDNF、BDNF、NGF、CNTF、PMP22等

3、正常雪旺細(xì)胞重要基因表達(dá)均為陽(yáng)性,沒(méi)有發(fā)生缺失。
　　 結(jié)論:雪旺細(xì)胞株RSC96在細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)規(guī)律等方面與正常雪旺細(xì)胞相近,S-100陽(yáng)性率達(dá)100％,在重要基因表型S-100、GDNF、BDNF、NGF、CNTF、PMP22表達(dá)陽(yáng)性,具備正常雪旺細(xì)胞功能,且增殖速度快、不易退化,因此可應(yīng)用于人工神經(jīng)支架材料的體外篩選。
　　 第二部分:PLLA及其與PCL共聚物納米纖維支架材料的體外篩選
　　 目的:對(duì)選取

4、的PLLA、P(LLA-CL)(75:25)、P(LLA-CL)(50:50)三種不同納米纖維支架材料,以及同一成份不同制備工藝的納米纖維支架材料,在體外應(yīng)用雪旺細(xì)胞株對(duì)其進(jìn)行鑒定比較,篩選出更適合進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)的人工神經(jīng)納米纖維支架材料成份和制備工藝。
　　 方法:通過(guò)掃描電鏡觀察納米纖維支架材料的顯微結(jié)構(gòu),并與細(xì)胞外基質(zhì)顯微結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較;通過(guò)細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞粘附試驗(yàn)和細(xì)胞形態(tài)學(xué)的觀察,鑒定比較三種納米纖維支架材料的生物相容性

5、;同時(shí)觀察納米纖維細(xì)絲取向?qū)?xì)胞排列的影響;通過(guò)Real Time PCR相對(duì)定量檢測(cè)三種支架材料共培養(yǎng)雪旺細(xì)胞株的S-100、GDNF、BDNF、NGF、CNTF、PMP22基因表達(dá)水平與未共培養(yǎng)雪旺細(xì)胞株相比較的變化。
　　 結(jié)果:三種材料均具有良好的生物相容性,細(xì)胞共培養(yǎng)情況良好,材料對(duì)細(xì)胞的基因表達(dá)并無(wú)明顯影響;三種材料之問(wèn)進(jìn)一步進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)P(LLA-CL)(75:25)支架材料在促進(jìn)細(xì)胞增殖和細(xì)胞粘附方面要明顯優(yōu)于