蝽亞科部分族的分子系統(tǒng)學(xué)研究（半翅目：蝽科）.pdf

1、運(yùn)用線粒體DNA中編碼rRNA蛋白質(zhì)的基因16S rRNA作為分子標(biāo)記,選取半翅目Hemiptera蝽科Pentatominae蝽亞科Pentatominae7族18屬22個(gè)代表種,共27個(gè)個(gè)體對(duì)其親緣關(guān)系進(jìn)行初步研究.通過(guò)特異引物擴(kuò)增和基因測(cè)序的研究方法獲得它們的線粒體DNA(mtDNA)的16S rRNA基因片段,并分析了其遺傳多態(tài)性.在擴(kuò)增的長(zhǎng)為400bp的基因片段中,去掉兩端引物,通過(guò)排序,有350個(gè)堿基可用于這27個(gè)個(gè)體的比較

2、.通過(guò)測(cè)定分析該基因片段的序列發(fā)現(xiàn),27個(gè)個(gè)體具有27種基因型,不同種群存在豐富的DNA序列多態(tài)性,同一種的不同個(gè)體差異較小.DNA序列應(yīng)用ClustalX1.8、DnaSP、Bioedit5.09、MEGA軟件進(jìn)行排序、比較和分析,并計(jì)算核苷酸組成、多態(tài)性位點(diǎn)以及遺傳距離,用鄰位相連法構(gòu)建Neighbor-joining(NJ)系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù),從而確定各類群之間的系統(tǒng)關(guān)系.通過(guò)分析得出以下結(jié)論:1.在國(guó)內(nèi)首次使用特異引物擴(kuò)增蝽亞科昆蟲(chóng)的m

3、tDNA-16S rRNA基因片段,通過(guò)測(cè)序獲得了蝽亞科7族18屬22種27個(gè)個(gè)體的基因序列片段.研究發(fā)現(xiàn)16S rRNA基因片段適合于族、屬之間親緣關(guān)系的研究.2.無(wú)水乙醇浸制標(biāo)本可應(yīng)用于總DNA的提取、16S rRNA基因片段的特異引物擴(kuò)增、提純和測(cè)序.3.該實(shí)驗(yàn)中,標(biāo)本DNA的輕微降解不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果.4.在擴(kuò)增的16S rRNA基因片段中,共檢測(cè)到核苷酸變異位點(diǎn)191個(gè),占總序列的54.57%,除去具缺失或插入的位點(diǎn)后,序列變異為

4、42.57%.A、T、C、G的平均含量為33.84%、43.24%、6.78%、16.14%,A+T的含量為77.08%,G+C的含量為22.92%,這一結(jié)果與昆蟲(chóng)中A+T的含量高于G+C的含量這一結(jié)論是一致的.5.以"Bootstrap Test of Phylogeny"1000次重復(fù)作出各個(gè)分枝的置信度.形成的Neighbor-Joining(NJ)、Minimum Evolution(ME)和Maximum Parsimony(

5、MP)分子系統(tǒng)樹(shù)表明,NJ樹(shù)的置信度最高.6.以蝽亞科昆蟲(chóng)27個(gè)個(gè)體的16S rRNA基因序列構(gòu)建的分子系統(tǒng)樹(shù)顯示:麻皮蝽屬與菜蝽屬的遺傳關(guān)系較近,二者位于進(jìn)化樹(shù)的底部,說(shuō)明這兩個(gè)種比其它類群起源較早;綠蝽屬和碧蝽屬的親緣關(guān)系比較近,二者又與玉蝽屬互為姐妹群;條蝽屬與斑須蝽屬互為姐妹群;二星蝽屬與輝蝽屬的親緣關(guān)系較近,之后二者又與卵圓蝽屬互為姐妹群;蝽族的真蝽屬與岱蝽屬的關(guān)系比全蝽屬的親緣關(guān)系近,全蝽屬與格蝽屬互為姐妹群.這與傳統(tǒng)分類中