核桃枝枯病病原鑒定及藥劑防治研究.pdf

1、核桃枝枯病(Walnut branches blight)是由真菌侵染引起核桃枝條枯萎、腐爛斷裂的一種嚴(yán)重病害，其傳播媒介主要是空氣、雨水和昆蟲(chóng)鳥(niǎo)獸等。盡管?chē)?guó)內(nèi)外的專(zhuān)家學(xué)者對(duì)核桃枝枯病展開(kāi)過(guò)廣泛的研究，然而復(fù)雜的地域地形，氣候土壤環(huán)境、病害病原等特點(diǎn)，引起核桃枝枯病的病原癥狀也存在一定的差距。本文以四川地區(qū)的雅安、綿陽(yáng)、宜賓一些主要核桃栽培區(qū)進(jìn)行枝枯病調(diào)查與研究，分析其生長(zhǎng)環(huán)境條件，確定發(fā)病規(guī)律與流行癥狀。以防治為最終目的，主要通過(guò)對(duì)四

2、川核桃枝枯病的侵染調(diào)查，病原種類(lèi)鑒定，病原生物學(xué)特性，田間病害動(dòng)態(tài)觀(guān)察及室內(nèi)外防治研究，取得如下結(jié)果:
　　(1)通過(guò)2014-2015年持續(xù)對(duì)核桃主要栽培地的田間發(fā)病動(dòng)態(tài)觀(guān)察，結(jié)果表明，核桃枝枯病發(fā)病初期由感染的小斑點(diǎn)向四周擴(kuò)散，形成塊狀、橢圓形或者不規(guī)則形，傷口部位的顏色由最初的暗綠色或者嫩綠色逐漸變成灰黑色、全黑色。該病在春季回暖的3-4月開(kāi)始發(fā)病，并迅速擴(kuò)展，到夏季成為病發(fā)高峰期，尤其在7-8月份達(dá)到了發(fā)病高潮，病株率為3

3、5％;9-10月份病害逐漸減弱，12月-2月份病情處于停滯狀態(tài);結(jié)合全年的觀(guān)察確定發(fā)病初期在3月份，高峰期在7-8月。
　　(2)通過(guò)科赫假定法則，按實(shí)驗(yàn)方法回接分離純化的菌株，接種7d觀(guān)察，病斑由小范圍迅速擴(kuò)展，并幾乎都引起了枝枯病的癥狀，對(duì)病株按常規(guī)分離培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)獲得的病原菌特征與原接種時(shí)的病原菌特征基本一致，即確認(rèn)BH01-BH05為引起核桃枝枯病的病菌。
　　(3)通過(guò)對(duì)菌株BH01-BH05菌落菌絲、孢子形態(tài)、顏

4、色變化的形態(tài)學(xué)觀(guān)察，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)勢(shì)、顏色、形態(tài)大小特征基本一致，因此確定BH01-BH05為同一菌種，參考相關(guān)文獻(xiàn)并結(jié)合分子生物學(xué)序列測(cè)試，建立系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，確定該菌BH01為新殼梭孢（Neofusicoccum parvum）。該菌一般7d布滿(mǎn)整個(gè)直徑9cm的PDA培養(yǎng)平板，形成圓形或者近似圓形的菌落，經(jīng)過(guò)紫外線(xiàn)照射10min中左右再培養(yǎng)7d后產(chǎn)孢子能力較快，分生孢子成近似圓形或橢圓形狀，一般大小在(15.2-17.2)μm×(4.6-6.4

5、)μrm。而在rDNA-ITS序列擴(kuò)增與序列測(cè)序，通過(guò)軟件clustalX和Mega5.0軟件進(jìn)行分析比對(duì)，建立系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)發(fā)現(xiàn)其中與該菌處于平行樹(shù)上的Neofusicoccum parvum（GenBank登陸號(hào):FJ904915）同源性最高，達(dá)到99％。該菌在國(guó)外瑞典、秘魯曾引起葡萄、核桃等的枝枯病，而引起我國(guó)核桃枝枯病系首次報(bào)道。
　　(4)通過(guò)核桃枝枯病病原生物學(xué)特性的測(cè)定，核桃枝枯病能夠流行和快速的傳播有一個(gè)與之較適應(yīng)的的

6、環(huán)境生態(tài)條件，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該菌新殼梭孢（Neofusicoccum parvum）在不同培養(yǎng)基下均能生長(zhǎng)，但PDA培養(yǎng)基生長(zhǎng)最好、其次PSA培養(yǎng)基、查氏培養(yǎng)基相對(duì)較好。該菌生長(zhǎng)適溫為25-35℃，其中最適溫度為25℃。在pH各個(gè)范圍均能生長(zhǎng)，但最適生長(zhǎng)為pH8。有光照的、相對(duì)濕度較高條件下有利于該菌最快。最佳碳源為葡萄糖，最次為甘露醇;最佳氮源為谷氨酸，而尿素對(duì)菌落抑制明顯，使其生長(zhǎng)緩慢;通過(guò)測(cè)定，確定致死溫度為60℃。根據(jù)結(jié)果可以判定四川

7、盆地環(huán)境的夏末秋初環(huán)境下，溫度高，濕度較大，與實(shí)驗(yàn)中生物學(xué)特性測(cè)定的最適宜環(huán)境相近，病害也發(fā)生嚴(yán)重的時(shí)候，因此對(duì)該病害發(fā)生與流行間斷具有可預(yù)測(cè)性，為病害高峰期前進(jìn)行重點(diǎn)防治工作提供了重要的理論依據(jù)
　　(5)在病原菌的傳播與越冬過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，核桃枝枯病主要通過(guò)雨水、風(fēng)、空氣，昆蟲(chóng)等傳播，其中腐朽的枯枝在第二年也會(huì)更容易引起病害，因此在平時(shí)注意做好修剪整形與核桃的防水工作，做好秋冬季節(jié)田間枯枝殘葉的清理工作，并及時(shí)祛除植株枝干上的病葉

8、并提前進(jìn)行藥劑防治，可適當(dāng)?shù)臏p少病害浸染源頭。該菌在冬季生長(zhǎng)能力弱，發(fā)病率低或者不發(fā)病，但是在春季溫度偏暖的情況下會(huì)發(fā)病。
　　(6)通過(guò)室內(nèi)藥劑篩選結(jié)果，9種藥劑在濃度1.25ug/mL-40ug/mL的中，均對(duì)病原菌有一定的抑制作用。隨著藥劑濃度的增大菌落開(kāi)始變小，其中藥效試驗(yàn)對(duì)核桃枝枯病的菌絲的抑制結(jié)果表明，在有效中濃度測(cè)定中，甲基托布津、多菌靈和百菌清對(duì)核桃枝枯病菌有明顯的抑制作用，甲基托布津?qū)Σ≡腅C50值最小，為4.