醫(yī)藥工業(yè)廢水對嗜熱四膜蟲(Tetrahymena thermophila)DNA損傷的研究.pdf

1、單細(xì)胞凝膠電泳(singlecellgelelectrophoresis，SCGE)是近年來經(jīng)過不斷完善逐步發(fā)展起來的一種快速檢測單細(xì)胞水平DNA損傷的新技術(shù)。若細(xì)胞DNA受損時，其斷片會進(jìn)入凝膠中，電泳時受損片段向陽極遷移，形成熒光拖尾現(xiàn)象，形似彗星，因此又稱彗星實驗(cometassay)。細(xì)胞DNA受損愈嚴(yán)重，產(chǎn)生的DNA片段就愈多，在電場作用下遷移的DNA量也就越多，表現(xiàn)為尾長的增加和尾部熒光強度的增強。通過測定DNA遷移部分的

2、光密度或遷移長度可定量地統(tǒng)計分析各組細(xì)胞的DNA損傷程度。由于彗星實驗簡便快速、需樣品量少、可檢測多種毒性物質(zhì)和適用于任何細(xì)胞類型等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于水質(zhì)監(jiān)測。
　　 嗜熱四膜蟲(Tetrahymenathermophila)作為生物材料，具有培養(yǎng)簡單，生活周期短，對環(huán)境的污染物敏感等特點。本實驗運用嗜熱四膜蟲，結(jié)合實驗的改良使得實驗過程變得更加簡便，從而建立快速準(zhǔn)確評價工業(yè)廢水的污染狀況的一種檢測方法。研究內(nèi)容主要是通過實驗證明

3、自制模板鋪膠可以取代傳統(tǒng)鋪膠。改良的嗜熱四膜蟲彗星實驗，與流式細(xì)胞術(shù)聯(lián)合檢測，以尾長、尾距、olive尾距等指標(biāo)綜合分析醫(yī)藥工業(yè)廢水（氯代廢水、吸附廢水）對四膜蟲DNA損傷情況，并且比較二者遺傳毒性以及嗜熱四膜蟲彗星實驗在其他種類工業(yè)廢水毒性檢測中的應(yīng)用。
　　 本文得出的實驗結(jié)論如下:
　　 (1)標(biāo)準(zhǔn)彗星實驗（傳統(tǒng)鋪膠）與改良彗星實驗（自制模板鋪膠）按常規(guī)方法操作，即培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)胞達(dá)對數(shù)期時，分別加入不同濃度的受試物（

4、過氧化氫），同時設(shè)相同體積的雙蒸餾水作為陰性對照組。暴露一段時間后，離心收集制成一定濃度的細(xì)胞懸液，然后制片、裂解、解旋、電泳、染色，在熒光顯微鏡下觀測結(jié)果。在相同暴露時間內(nèi)，同一H2O2濃度下DNA損傷從尾長、尾距、Olive尾距上保持一致。由此可見，自制電泳槽可以取代磨砂載玻片的鋪膠法。
　　 (2)改良彗星實驗對醫(yī)藥工業(yè)廢水的檢測，結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。結(jié)果表明，該實驗改良可以提高效率和穩(wěn)定性，不同稀釋倍數(shù)

5、的醫(yī)藥工業(yè)廢水所引起四膜蟲細(xì)胞DNA損傷之間呈現(xiàn)良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系，這個結(jié)果與流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)論一致。在稀釋相同倍數(shù)的情況下，吸附廢水的遺傳毒性大于氯代廢水。
　　 (3)本文利用改良彗星實驗，對其他四類工業(yè)廢水（苯甲酸廢水、苯甲腈廢水、苯甲酸芐酯、氯堿廢水）進(jìn)行了相應(yīng)的檢測。結(jié)果表明，四種工業(yè)廢水引起四膜蟲DNA損傷的程度是不同的，其中四種廢水對嗜熱四膜蟲DNA毒性的強弱為:苯甲腈廢水＞苯甲酸廢水＞苯甲酸芐酯廢水＞氯堿廢水。<