花對(duì)稱性基因SQU在露地菊‘火焰’中的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、露地菊‘火焰’(Chrysanthemum morifolium‘Huoyan’)是常用的園林綠化觀賞花卉。其特點(diǎn)為:繁殖快,花型眾多、顏色豐富、抗逆性強(qiáng)、觀賞價(jià)值高等。本研究選取從百脈根(Lotus japonicas)中得到的SQU基因作為遺傳轉(zhuǎn)化基因,以潮霉素為篩選介質(zhì),采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)入露地菊‘火焰’,探尋高效穩(wěn)定的遺傳轉(zhuǎn)化體系,培育擁有獨(dú)特花瓣性狀的新品種,研究SOU基因?qū)τ诼兜鼐铡鹧妗硇偷挠绊?從而了解其進(jìn)化、親緣

2、關(guān)系,擴(kuò)充CYC類(lèi)基因資源。
　　 主要研究結(jié)果如下:
　　 1露地菊‘火焰’遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立
　　 通過(guò)對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化中各影響因子的具體分析建立了高效的遺傳轉(zhuǎn)化體系。該體系為:利用30d苗齡的露地菊‘火焰’葉片外植體為材料,經(jīng)預(yù)培養(yǎng)2d,用OD600值為0.4的農(nóng)桿菌侵染10min,在25℃黑暗條件下共培養(yǎng)2d,進(jìn)行4d延遲培養(yǎng),以300mg/L的Cef為抑菌濃度,采用選擇壓遞增的方式,初篩選采用8mg/L潮霉素

3、,待出芽后切下轉(zhuǎn)入采用10mg/L潮霉素的復(fù)篩培養(yǎng)基,將篩選后得到芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基至產(chǎn)生生根茁壯的轉(zhuǎn)化植株。
　　 2轉(zhuǎn)基因植株的獲得
　　 將轉(zhuǎn)化植株利用潮霉素引物進(jìn)行PCR檢測(cè)獲得三個(gè)陽(yáng)性植株,再利用基因特異性引物進(jìn)行PCR檢測(cè)獲得與上步同樣的三個(gè)陽(yáng)性植株,確認(rèn)此三株為成功的轉(zhuǎn)基因植株。轉(zhuǎn)化率為1.5‰。
　　 3轉(zhuǎn)基因植株的表型觀察
　　 利用非轉(zhuǎn)基因植株實(shí)驗(yàn)得知,將植株栽培在含有土:蛭石=1:1的