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文檔簡介
1、RNAi作用是內(nèi)源性或外源性的雙鏈RNA(dsRNA)在Dicer酶的作用下形成21-25nt大小的小干擾RNA(siRNA)，siRNA在Ago蛋白的作用下，組裝到RNA誘導的沉默復合物(RISC)中，從而特異性地對同源靶標mRNA進行切割消化進而抑制其表達翻譯。自這種基于序列特異性dsRNA對特定基因的沉默作用被發(fā)現(xiàn)后，就具備用來對昆蟲的基因進行下調(diào)，進而達到抗蟲并使害蟲致死的潛能。另外，利用RNAi技術(shù)抗蟲可以有效抵抗蟲害，并且比
2、較安全，更為重要的是昆蟲進化不易對其產(chǎn)生抗性，這些優(yōu)點使得RNAi技術(shù)成為新的抗蟲策略的首選。
在利用RNAi技術(shù)進行抗褐飛虱轉(zhuǎn)基因水稻的研究時，首先需要選擇效率高的靶標dsRNA，其次需要產(chǎn)生高通量的dsRNA，此外還要確保轉(zhuǎn)基因水稻產(chǎn)生的dsRNA可以在昆蟲進食后運輸?shù)嚼ハx體內(nèi)并發(fā)揮RNAi作用。因此本研究中選擇了的靶標dsRNA基因有陽離子氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白基因Cationic Amino AcidTransporter
3、，己糖轉(zhuǎn)運蛋白基因Hexose Transporter1，核糖體蛋白基因Ribosomal protein L23及Ribosomal protein S3e。研究中針對所選的基因成功構(gòu)建4個干擾載體，通過農(nóng)桿菌介導的方法導入到水稻Oryza sativa中，對獲得的轉(zhuǎn)基因水稻進行Western blot分析，檢測到轉(zhuǎn)基因水稻中草甘膦抗性基因1174成功表達，Northern blot分析表明轉(zhuǎn)基因水稻成功表達dsRNA。此外還對轉(zhuǎn)基因
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