2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、褐飛虱(Nilaparvata lugens(St(a)l))屬同翅目(Homoptera)飛虱科(Dekphacidae),是我國及許多亞洲國家稻區(qū)的主要害蟲。目前,防治褐飛虱的主要方法是化學防治。但是,長時間使用化學農藥帶來了農藥殘留,環(huán)境污染和害蟲產生抗藥性等問題。RNA干擾(RNA interference,RNAi)近年來迅速發(fā)展,廣泛應用于基因功能確定、基因敲除、抗癌癥和病毒病藥物研究等方面的研究,也為病蟲害防治提供了一個新

2、的方向。
  本論文選取了4個褐飛虱生理活動相關基因作為靶標基因?;赗NAi技術構建了RNA干擾載體并轉化水稻,獲得了4種能分別表達各自靶標dsRNA的轉基因植株。其中,2個靶標基因是褐飛虱蔗糖酶基因(命名為145、282),2個是蔗糖轉運子基因(命名為303、246)。
  本論文采用玉米泛素啟動子(Zea maypolyubiquitin-1 promoter, ZmUbi)指導dsRNA表達,用抗草甘膦基因G10ev

3、o(5-烯酮式丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶,EPSPS)作為篩選標記,構建dsRNA的表達載體。利用農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導轉化的方法將表達載體分別轉化粳稻品種“秀水134”,獲得了表達各自靶標基因dsRNA的抗草甘膦轉基因水稻。
  在T0代轉基因植株(145基因17株、282基因15株、303基因15株、246基因13株)的褐飛虱生物活性測定中,實驗組褐飛虱數量與對照組并沒有明顯差異。雖然

4、蟲體死亡或數量減少,但大多為接蟲時的機械損傷或褐飛虱逃逸所致,轉基因植株相較對照組并沒有表現出褐飛虱抗性。在T0代145、282、303、246轉基因植株中,每個基因選取7個株系的種子進行發(fā)芽,并在水稻5葉期噴施200倍的草甘膦篩選陽性轉基因植株。用Northern Blot的方法對陽性植株的dsRNA表達情況進行檢測,結果表明每個基因中均有dsRNA表達量較高的株系存在(145基因為4、7號,282基因為1、3、7號,303基因為4、

5、6號,246基因為2、5、7號)。根據Northern Blot的結果,每個基因選取3個dsRNA表達量最高的株系進行褐飛虱生物活性測定,結果發(fā)現,轉基因水稻并沒有表現出明顯的褐飛虱抗性。對轉基因水稻T1代植株進行Northern Blot實驗,發(fā)現T1代植株可以表達靶標基因的dsRNA。這說明轉基因水稻表達dsRNA這一性狀能穩(wěn)定地遺傳至T1代,但是轉基因水稻T0和T1代都沒有表現出明顯的褐飛虱抗性,這可能是由于植株內dsRNA濃度太

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