甘蔗蔗糖轉(zhuǎn)運相關(guān)基因的克隆及表達分析.pdf

1、蔗是一種高光效的C4植物,可在其成熟莖節(jié)中積累高濃度的蔗糖。蔗糖是甘蔗能源物質(zhì)從源到庫轉(zhuǎn)運過程中的主要形式,主要通過兩種途徑進行轉(zhuǎn)運:即利用胞間連絲在細胞間轉(zhuǎn)運的共質(zhì)體途徑及穿過細胞壁和細胞間隙轉(zhuǎn)運的質(zhì)外體途徑,兩種轉(zhuǎn)運方式在不同的組織類型和發(fā)育時期占有不同的地位。蔗糖的轉(zhuǎn)運需要H+-ATPase形成質(zhì)子電化學勢差并由蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白介導完成。因此,分離克隆甘蔗中液泡ATP酶基因和蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因并鑒定其蛋白的功能,可為分析兩種蛋白的互作、

2、闡明甘蔗蔗糖的運輸和積累機制提供理論依據(jù),并為培育高蔗糖含量的甘蔗新品種提供理論基礎(chǔ)。
　　 本實驗通過RACE技術(shù)獲得了shVHA-C和ShSUT2全長核酸序列,分析顯示:shFHA-C核酸序列全長1312bp,具有完整的編碼閱讀框,編碼區(qū)為3-1058bp,共編碼351個氨基酸,ShVHA-C與水稻的OsVHA-C同源性達94.10％。ShSUT2核酸序列全長1906bp,具有完整的編碼閱讀框,編碼區(qū)為37-1560bp,共

3、編碼507個氨基酸,并具有典型的12次跨膜結(jié)構(gòu)的特征。ShSUT2與大麥的HvSUT2同源性達72.25％。
　　 此外,以甘蔗品種新臺糖22號的根、莖、葉RNA作為模板,以GAPDH做為內(nèi)參基因,對兩種基因進行初步RT-PCR表達分析。結(jié)果顯示ShVHA-C和ShSUT2在所有檢測的組織中都表達,在葉中表達最強,根中最弱。
　　 綜合上述,初步證明:克隆得到的ShVHA-C是甘蔗液泡ATP酶C亞基基因,克隆得到的ShS