兒菜MAX途徑相關(guān)基因的克隆及表達分析.pdf

1、兒菜(Brassica juncea var.gemmifera Lin.)是芥菜的一個變種，是一種長江流域普遍種植的蔬菜作物，屬十字花科蕓薹屬。兒菜的生產(chǎn)主要集中在長江流域，其他地區(qū)并沒有普及，產(chǎn)量不足以供應(yīng)給其他地區(qū)。如果能提高其產(chǎn)量，對增加兒菜的供應(yīng)量，滿足市場需要具有重要的意義。利用分子生物學技術(shù)研究其側(cè)芽（即兒菜的可食用部分）相關(guān)基因的表達，對于提高兒菜的產(chǎn)量提供技術(shù)支持。
　　通過對擬南芥突變體的分析，發(fā)現(xiàn)在擬南芥中有

2、一個調(diào)控植物側(cè)芽發(fā)生的途徑，即MAX途徑。該途徑包含了MAX1，MAX2，MAX3，MAX4基因的調(diào)控以及與生長素，細胞分類素和獨腳金萌發(fā)素內(nèi)酯三種激素的相互作用。目前，這些基因在豌豆，牽?；ê退局卸加型椿虮豢寺　１菊n題以兒菜和芥菜側(cè)芽的表型特征和分子生物學特性為基礎(chǔ)，重點對控制側(cè)芽發(fā)生的MAX途徑相關(guān)的幾個基因進行研究。目前對兒菜中的這類基因研究還沒有。我們以野生型兒菜和芥菜為材料對兒菜側(cè)芽相關(guān)基因進行了研究，主要研究結(jié)果如下：

3、
　　（1）利用RT-PCR的方法在兒菜和芥菜根、側(cè)芽等組織的mRNA中擴增相關(guān)基因片段，得到其cDNA序列，分別命名為eMAX2，eMAX3和eMAX4及jMAX2，jMAX3和jMAX4。與擬南芥相關(guān)基因的同源性分別為MAX284％，MAX356%，MAX487%。eMAX2和jMAX2基因片段，eMAX3和jMAX3基因片段的核苷酸序列完全一致，而eMAX4基因片段相對于jMAX4基因片段發(fā)生了幾個點突變。
　?。?）

4、以兒菜和芥菜Actin基因的特異表達為參照，通過半定量RT-PCR分析，研究兒菜eMAX2，eMAX3和eMAX4基因與芥菜jMAX2，jMAX3和jMAX4基因的表達模式差異，結(jié)果表明MAX2基因在芥菜中的表達量明顯高于在兒菜中的表達量，而MAX3基因和MAX4基因在兒菜和芥菜中的表達量幾乎沒有差別。
　?。?）對兒菜和芥菜分別用生長素，細胞分裂素，獨腳金萌發(fā)素內(nèi)酯進行處理，然后通過半定量RT-PCR分析，研究這三種激素對MAX