華南忍冬與鈣代謝途徑相關(guān)基因的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、西南巖溶地區(qū)因其碳酸鹽巖風(fēng)化造成了該巖溶生態(tài)系統(tǒng)土壤的富鈣性，而華南忍冬則對(duì)這種高鈣的土壤條件表現(xiàn)出較好的適應(yīng)性。忍冬屬于藤本植物，其繁殖能力強(qiáng)，根系尤為發(fā)達(dá)，對(duì)防止水土流失，恢復(fù)當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)起著非常重要的作用。研究表明，華南忍冬之所以能在巖溶區(qū)生長(zhǎng)良好，與植物體的組織結(jié)構(gòu)和本身的泌鈣機(jī)能密切相關(guān)。因此，本論文中通過(guò)對(duì)華南忍冬不同濃度的鈣鹽處理，并對(duì)與鈣代謝途徑相關(guān)的基因進(jìn)行了序列分析以及表達(dá)量研究，獲得了如下的研究結(jié)果：
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2、1)克隆的華南忍冬(Lonicera coNFusa)和忍冬(Lonicera japonica)的鈣調(diào)蛋白cDNA序列全長(zhǎng)均為450bp，編碼150個(gè)氨基酸。利用NCBI中的Blast分析，與報(bào)道的其他物種鈣調(diào)蛋白基因同源性均在90％以上。兩種忍冬的鈣調(diào)蛋白與油茶(Camellia oleifera)的同源性達(dá)到98％；與茄科(Solanum tuberosum)的同源性為95％；與長(zhǎng)春花(Catharanthus roseus)的同

3、源性也較高為96％；與玉米(Zea mays)、小麥(Triticum aestirum)、水稻(Oryza sativa)等單子葉植物的同源性均為93％。蛋白質(zhì)比較分析結(jié)果顯示物種間鈣調(diào)蛋白同源性更高，僅個(gè)別氨基酸位點(diǎn)發(fā)生突變，進(jìn)一步說(shuō)明了鈣調(diào)蛋白的高度保守性。測(cè)序得到的華南忍冬鈣調(diào)蛋白DNA序列全長(zhǎng)為2053bp，經(jīng)分析在鈣調(diào)蛋白DNA序列僅有一個(gè)拷貝。
　　 (2)對(duì)不同鈣鹽處理?xiàng)l件下華南忍冬和忍冬鈣調(diào)蛋白基因進(jìn)行熒光定量

4、PCR檢測(cè)，結(jié)果表明，兩種忍冬科植物的鈣調(diào)蛋白基因的表達(dá)水平均隨著鈣濃度的升高而升高；且忍冬升高水平顯著，華南忍冬升高水平較平緩。
　　 (3)克隆的華南忍冬鈣調(diào)蛋白激酶基因的cDNA序列全長(zhǎng)為960bp，編碼263個(gè)氨基酸，與報(bào)道的其他物種CDPKs基因同源性在85％左右。
　　 (4)克隆的華南忍冬鈣轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因ACA1的cDNA序列全長(zhǎng)為3057bp，編碼1018個(gè)氨基酸，與報(bào)道的擬南芥的ACA1基因同源性為80％