仔豬多胺代謝相關(guān)基因的克隆與表達分析.pdf

1、為了研究多胺代謝相關(guān)基因在仔豬機體內(nèi)的作用，本文以斷乳前后仔豬為研究對象，依據(jù)報道的人、小鼠和大鼠的相似基因序列對豬的ESTs庫和UniGene進行搜索并拼接序列設(shè)計引物進行RT-PCR，在豬體內(nèi)克隆了以下七種與多胺代謝相關(guān)的基因：精氨酸脫羧酶（Arginine decarboxylase，ADC）；鳥氨酸脫羧酶（Ornithine decarboxylase，ODC）；鳥氨酸轉(zhuǎn)氨酶（Ornithine aminotransferase

2、，OAT）；鳥氨酸脫羧酶抗酶蛋白-1（Ornithine decarboxylase antizyme 1，OAZ1）；鳥氨酸脫羧酶抗酶蛋白-2（Ornithine decarboxylase antizyme 2，OA22）；鳥氨酸脫羧酶抗酶蛋白-3（Ornithine decarboxylase antizyme 3，OA23）；多胺調(diào)控因子-1（Polyamine-modulated factor 1，PMF1）。測定了這7種基因

3、的序列，并分別與人、小鼠和大鼠的相關(guān)基因進行了同源性分析。試驗采用半定量RT-PCR法，以18S rRNA為內(nèi)標，研究仔豬于斷乳前后各組織中這些多胺代謝相關(guān)基因mRNA表達水平。主要結(jié)果如下： 豬精氨酸脫羧酶基因：克隆的豬ADC基因片段長1602 bp，包含一個完整的開放閱讀框架（open reading frame，ORF），全長1380 bp，推測蛋白編碼由460個氨基酸殘基組成。豬ADC基因與人、小鼠的同源性分別為91．1

4、％和87．4％，推測的氨基酸序列同源性分別為89．7％和87％。半定量分析顯示，在斷乳前后ADC mRNA在機體內(nèi)的表達量均很低，部分組織幾乎檢測不到；斷乳后，盲腸和直腸的表達量有所上升，其它各組織都有所下降。 豬鳥氨酸脫羧酶基因：克隆的豬ODC基因片段長1422 bp，包含一個完整的ORF，全長為1383 bp，推測蛋白編碼由461個氨基酸殘基組成。豬ODC基因與人、小鼠和大鼠的同源性分別為86．1％、84．8％和84．4％，

5、推測的氨基酸序列同源性分別為93．1％、89．8％和90．5％。半定量分析顯示，在斷乳前后ODC mRNA在機體各組織都有分布，但含量都不高；斷乳后，盲腸和直腸的表達量有很大上升，空腸、回腸和結(jié)腸的表達量都有小幅下降。 豬鳥氨酸轉(zhuǎn)氨酶基因：克隆的豬OAT基因片段長1465 bp，包含一個完整的ORF，全長為1317 bp，推測蛋白編碼由439個氨基酸殘基組成。豬OAT基因與人、小鼠和大鼠的同源性分別為87．1％、82．2％和82

6、．2％，推測的氨基酸序列同源性分別為91．8％、90．5％和89．8％。半定量分析顯示，在斷乳前后OAT mRNA在機體各組織廣泛存在；斷乳后，腎的表達量有明顯上升，十二指腸、空腸和回腸都有所下降。 豬鳥氨酸脫羧酶抗酶蛋白-1基因：克隆的豬OAZ1基因片段長874 bp，包含一個完整的ORF，全長為681 bp，推測蛋白編碼由227個氨基酸殘基組成，序列分析顯示該基因存在移框機制。豬OAZ1基因與人、小鼠和大鼠的同源性分別為92

7、．5％、85．1％和84．3％，推測的氨基酸序列同源性分別為93．4％、83．8％和82．5％。半定量分析顯示，在斷乳前后OAZ1 mRNA在機體內(nèi)都有廣泛而豐富的表達；斷乳后，除了胃，其它組織表達水平均有所提高。 豬鳥氨酸脫羧酶抗酶蛋白-2基因：克隆的豬OA22基因片段長678 bp，包含一個完整的ORF，全長為568 bp，推測蛋白編碼由189個氨基酸殘基組成，序列分析顯示該基因存在移框機制。豬OA22基因與人、小鼠和大鼠的

8、同源性分別為98．1％、97．9％和97．2％，推測的氨基酸序列同源性分別為99．5％、98．9％和98．9％。半定量分析顯示，在斷乳前后OAZ2 mRNA在機體內(nèi)都有廣泛而豐富的表達；斷乳后，所有組織的表達量都有不同程度上升，尤以盲腸上升幅度最大。 豬鳥氨酸脫羧酶抗酶蛋白-3基因：克隆的豬OA23基因片段長667 bp，包含一個完整的ORF，全長為559 bp，推測蛋白編碼由186個氨基酸殘基組成，序列分析顯示該基因存在移框機

9、制。豬OA23基因與人、小鼠和大鼠的周源性分別為89．6％、85．5％和84．8％，推測的氨基酸序列同源性分別為90．4％、87．5％和84．2％。半定量分析顯示，在斷乳前后OAZ3 mRNA在機體內(nèi)廣泛分布，個別組織表達量低；其在腸道組織的表達量于斷乳后均有不同幅度上升。 豬多胺調(diào)控因子-1基因：克隆的豬PMF1基因片段長703 bp．包含一個完整的ORF，全長為615 bp，推測蛋白編碼由205個氨基酸殘基組成。豬PMF1基