梨褐皮芽變果皮多胺代謝與相關(guān)基因克隆表達及pB1121-SPMS轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建.pdf

1、梨是一種營養(yǎng)豐富、深受人們喜愛的水果，其果皮色澤作為評價果實商品價值指標(biāo)之一，向來極受關(guān)注。多胺作為一種重要的植物生長發(fā)育調(diào)節(jié)物質(zhì)，參與植物生長發(fā)育的各個環(huán)節(jié)，并在植物抗逆性中也發(fā)揮著重要作用。為了探討多胺在‘碭山酥梨’褐皮芽變品系‘銹酥’果皮褐色形成中的作用，試驗以‘碭山酥梨’和‘銹酥’花后不同時期果皮為試材，采用HPLC方法測定了兩者果皮中多胺含量，運用RACE技術(shù)克隆出多胺合成過程中相關(guān)基因，利用Protparam網(wǎng)站對基因進行生

2、物信息學(xué)分析、通過MEGA5.0軟件分析基因蛋白系統(tǒng)進化，并通過Real-time PCR技術(shù)分析其在不同時期果皮中表達差異；同時構(gòu)建了多胺合成過程中SPMS基因的表達載體。試驗獲得主要結(jié)果如下：
　　(1)除花后50 d和150 d兩個時期外，其它時期‘碭山酥梨’果皮中Put含量均顯著高于‘銹酥’，花后不同時期‘碭山酥梨’和‘銹酥’果皮中Spd、Spm均呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢?；ê?5 d時，‘銹酥’果皮中Spd和Spm含量明顯

3、高于‘碭山酥梨’果皮中的含量；Put在花后初期較高，隨后有個降低升高再降低的過程，在花后75 d時‘碭山酥梨’果皮中Put含量要高于其在‘銹酥’果皮中的含量。
　　(2)以‘銹酥’cDNA為模板，利用RACE技術(shù)獲得ADC、ODC、SPDS、SPMS和SAMS基因核苷酸序列。ADC基因序列全長為2193 bp，編碼527個氨基酸，基因登錄號為KM923903；ODC基因序列全長為1278 bp的全長，編碼305個氨基酸，基因登錄號

4、為KP144199；SPMS基因序列全長為1110 bp，編碼242個氨基酸，基因登錄號為KM923906；SPDS基因序列全長為909 bp，編碼221個氨基酸，基因登錄號為KM923905；SAMS基因序列全長為1182 bp，編碼521個氨基酸，基因登錄號為KM923904。預(yù)測了編碼蛋白的理化性質(zhì)， ADC、SPMS、SAMS三個蛋白均為水溶性蛋白。ADC、ODC、SPDS、SPMS和SAMS基因的預(yù)測蛋白與蘋果的親緣關(guān)系最近，

5、同源性分別為91.9％、96.6%、97.3%、90.8%、94.6%。
　　(3) ADC、SPDS、SPMS和ACL5基因在‘碭山酥梨’和‘銹酥’不同時期果皮中表達量結(jié)果表明，花后50 d時，多胺合成中相關(guān)基因在‘銹酥’果皮中表達量明顯高于其在‘碭山酥梨’果皮中的表達量。ADC、SPDS和SPMS基因表達量均表現(xiàn)為先增加后降低的趨勢，該結(jié)果與多胺含量變化趨勢具有一致性，而ACL5基因變化和其它三個基因變化趨勢不同，但在75 d