臍橙果皮光澤型突變體及相關(guān)基因克隆與表達(dá)分析.pdf

1、臍橙果皮光澤型突變體是來自紐荷爾臍橙的芽變品種。該突變體的顯著特征是果皮極富光澤。目前，關(guān)于這一突變體在相關(guān)文獻(xiàn)中還未見報(bào)道。該突變體的發(fā)現(xiàn)，將為研究控制柑橘果皮光澤度蠟質(zhì)的合成途徑、運(yùn)輸途徑和果皮光澤型突變體形成的分子機(jī)理提供珍貴的材料。本研究以臍橙果皮光澤型突變體和普通紐荷爾臍橙為實(shí)驗(yàn)材料，研究該突變體遺傳穩(wěn)定性、生物學(xué)性狀及蠟質(zhì)合成中的兩個(gè)關(guān)鍵基因FA TB和CUT1的克隆和表達(dá)分析，研究結(jié)果如下:
　　 1.臍橙果皮光澤

2、型突變體比普通紐荷爾臍橙果面光滑、果皮易剝離、成熟期提前和富有光澤等特點(diǎn)，根據(jù)掃描電鏡可知臍橙果皮光澤型突變體果皮表面蠟質(zhì)晶體比普通紐荷爾臍橙稀薄，且該突變體主要生物學(xué)性狀穩(wěn)定。
　　 2.使用Trizol提取試劑和改進(jìn)的Trizol法分別提取臍橙葉片和果皮的總RNA，均得到了較好的效果，可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);運(yùn)用RT-PCR法成功地從臍橙中克隆出了蠟質(zhì)FATB基因，利用生物信息學(xué)法得出臍橙果皮光澤型突變體的CsFATB基因長(zhǎng)14

3、07bp，包含一個(gè)1254bp的開放閱讀框，編碼418個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)分子量為46.06kDa，等電點(diǎn)為7.76。蛋白序列與其它物種的同源性在55％-79％之間;利用半定量RT-PCR表達(dá)分析得出，普通紐荷爾臍橙CsFATB基因在葉片和果皮的發(fā)育后期表達(dá)較強(qiáng);而臍橙果皮光澤型突變體CsFATB基因在葉片和果皮的發(fā)育后期表達(dá)較弱。此外，CsFATB基因在臍橙果皮光澤型突變體果皮和葉片的發(fā)育早期比普通紐荷爾臍橙表達(dá)強(qiáng)，但在成熟期該突變體要比

4、普通紐荷爾臍橙表達(dá)弱。
　　 3.運(yùn)用RT-PCR法成功地從臍橙中克隆出了蠟質(zhì)CsCUT1基因，利用生物信息學(xué)法得出臍橙果皮光澤型突變體CsCUT1基因序列與普通紐荷爾CsCUT1基因序列分別在第43位、第258位和第548位存在著差異，臍橙果皮光澤型突變體CsCUT1基因序列包含一個(gè)1287bp的開放閱讀框，編碼429個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)分子量為53.6kDa，等電點(diǎn)為5.30。而普通紐荷爾臍橙CsCUT1基因序列卻包含一個(gè)148