南瓜矮化突變體cga的遺傳、生理生化及相關(guān)基因表達(dá)分析.pdf

1、浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院博士學(xué)位論文南瓜矮化突變體cga的遺傳、生理生化及相關(guān)基因表達(dá)分析姓名：武濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：蔬菜學(xué)指導(dǎo)教師：曹家樹20080427摘要32和36d高于野生型植株；POD活性研究結(jié)果表明，cga植株不同發(fā)育階段節(jié)間和葉片POD潘|生高于野生型植株，而野生型植株擁有較高的根組織POD活性；cga與野生型植株葉片的POD活性要低于其節(jié)間和根；cga與野生型植株的根、葉片和節(jié)間均有典型特征的POD同工酶譜帶；植

2、株節(jié)間POD同工酶不僅在數(shù)量上存在差異，同時(shí)也在表達(dá)量上存在較大差異。此外，cga與野生型植株不同發(fā)育時(shí)期根和節(jié)間的可溶性總蛋白帶型存在差異。利用ELISA(enzymelinkedirnmunosorbentassay)技術(shù)對(duì)cga與野生型植株內(nèi)源激素分析表明，cga植株不同發(fā)育時(shí)期節(jié)I盲qOA3、IAA和G～含量均低于野生型植株：cga植株根和葉片的GA3含量也低于野生型植株。(4)運(yùn)用cDNAAFLP技術(shù)對(duì)南瓜矮化突變體cga與野

3、生型植株蔓伸長(zhǎng)相關(guān)基因進(jìn)行差異表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)有57條TDFs，它們代表的基因分別涉及能量與代謝相關(guān)基因、未知功能蛋白、未知基因、植物抗性相關(guān)基因、細(xì)胞壁生物合成與修飾相關(guān)基因、信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)基因和轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)基因。選取其中6個(gè)差異片段進(jìn)行了RTPCR驗(yàn)證，有4個(gè)差異片段的表達(dá)模式與eDNAAFLP分析結(jié)果一致。同時(shí)，上述4個(gè)陽性差異片段在在野生型不同組織中擁有不同的表達(dá)模式。(s上以eDNAAFLP結(jié)果為基礎(chǔ)，利用同源擴(kuò)增技術(shù)，從南瓜矮化

4、突變體cga的野生型植株中獲得一個(gè)編碼NADH脫氫酶的新基因，命名為CucurbimmoschataBushrelated1(CmBul)。該eDNA全長(zhǎng)545bp，含有477bp的完整開放閱讀框。CmBul在核苷酸水平上與甘藍(lán)葉綠體NADH脫氫酶J亞基有99％的相似性。推導(dǎo)的CmBul氨基酸序列與擬南芥葉綠體NADH脫氫酶J亞基有99％的相似性。通過Prosite數(shù)據(jù)庫(kù)查詢，發(fā)現(xiàn)其存在許多結(jié)構(gòu)域，其中主要包括1個(gè)呼吸鏈NADH脫氫酶3