大果水晶梨及其褐色果皮突變體pal基因克隆及表達(dá)分析.pdf

1、大果水晶梨褐色果皮突變體與大果水晶梨原品種相比,在果皮表面有一層木栓層。木栓層中的木質(zhì)素是苯丙烷類代謝途徑產(chǎn)生的酚類化合物的聚合物。苯丙氨酸解氨酶(PAL)是苯丙烷代謝過程中的第一個(gè)關(guān)鍵酶。因此,研究pal基因?qū)τ谔剿鞔蠊Ю婧稚ね蛔凅w的形成具有重要意義。
　　以大果水晶梨及其褐色果皮突變體的葉片為材料提取DNA,分別以原品種和突變體的DNA為模板克隆pal。分別在幼果期(果點(diǎn)、果皮均未變褐)、果點(diǎn)變褐期、果皮變褐期和采收期

2、采取果實(shí)樣品,測定果皮PAL的活性、蛋白質(zhì)含量、比活力及其pal的基因表達(dá)。結(jié)果如下:
　　在果實(shí)幼果期、果點(diǎn)變褐期和果皮變褐期突變體果皮中的PAL活性和蛋白含量略高于原品種。在果點(diǎn)變褐期和果皮變褐期,大果水晶梨突變體果皮的PAL比活力均高于原品種。
　　分別以大果水晶梨及其褐色果皮突變體葉片的DNA為模板,使用引物Ⅰ克隆得到大果水晶梨及其突變體的pal1的基因片段,序列分析表明兩者沒有差異。以3對簡并引物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分別克隆

3、得到大果水晶梨及其褐色果皮突變體的pal2基因的片段。利用DNAMAN軟件對序列進(jìn)行拼接,得到2414bp的大果水晶梨pal2序列,其中外顯子1997bp,內(nèi)含子417bp;翻譯得到的氨基酸序列由665個(gè)氨基酸組成。得到2411bp的大果水晶梨突變體的pal2序列,其中外顯子2001bp,內(nèi)含子410bp;翻譯得到的氨基酸序列包含666個(gè)氨基酸。大果水晶梨pal2的內(nèi)含子長于突變體的7bp。
　　大果水晶梨及其褐色果皮突變體在不同