梨極矮化突變體S基因型鑒定與DELLA蛋白編碼基因的克隆.pdf

1、本研究以延邊小香水梨實(shí)生后代中發(fā)現(xiàn)的矮化緊湊的突變體等17個(gè)梨屬砧木及延邊地區(qū)栽培梨品種為試材，應(yīng)用PCR擴(kuò)增及克隆、測(cè)序技術(shù)分離其S基因，使用生物信息學(xué)軟件對(duì)各序列進(jìn)行分析和同源性搜索比對(duì)，最終確定各品種的S基因型，初步推測(cè)梨極矮化突變體親本；應(yīng)用RT-PCR、cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（RACE）克隆梨極矮化突變體和蘋果梨DELLA家族蛋白編碼基因的編碼區(qū)全長。主要研究結(jié)果如下：
　　梨矮化突變體等17個(gè)梨屬砧木及延邊地區(qū)栽培梨

2、品種的S基因型分別為：“極矮化突變體”、“蘋果梨”、“東寧五號(hào)大梨”、“延光梨”、“S2(中矮一號(hào))”、“S7”為 S1S17；“蘋博香”為 S1S8m；“早酥”為 S1Sd；“延邊謝花甜”、“S5”為 S17S31；“尖把梨”為 S12S30；“延邊明月梨”為 S3Se；“小香水芽變”為 SeSx；“朝鮮洋梨”為 SeS3；“身不知”為 S5Sd；“PDR54（中矮二號(hào)）”為 S4S8S17；“山梨”為 S12Sx。其中“蘋博香”的S

3、8m為新基因，“PDR54”為三倍體。
　　利用 RACE技術(shù)從梨極矮化突變體中克隆到一個(gè)編碼 DELLA家族蛋白的全長cDNA序列，命名為PuRGL。該基因全長1743bp，包含一個(gè)完整的編碼580個(gè)氨基酸的開放閱讀框（ORF）。PuRGL與MdRGL2a、MhGAI、RcGAI、PtRGAS、AtRGL2的同源性分別為98％、98%、82%、81%、77%；結(jié)構(gòu)分析表明該基因具有DELLA家族蛋白的典型結(jié)構(gòu)域。
　　利用

4、 RACE技術(shù)從蘋果梨中克隆到兩個(gè)編碼 DELLA家族蛋白的全長 cDNA序列，分別命名為PbRGL1和PbRGL2。PbRGL1全長1755bp，包含一個(gè)完整的編碼584個(gè)氨基酸的ORF，PbRGL1與MdRGL2b、MhGAI、RcGAI、PtGAS、AtRGL2的同源性分別為99%、93%、83%、82%、78%、78%；PbRGL2全長1743bp，包含一個(gè)完整的編碼580個(gè)氨基酸的ORF，PbRGL2與MdRGL2a、MhGA