褐飛虱細(xì)胞色素單加氧酶基因的功能分析.pdf

1、細(xì)胞色素單加氧酶(P450)酶系又稱作多功能氧化酶(MFO)，是一類代謝酶并且廣泛存在于所有需氧生物體，它可以催化和調(diào)控內(nèi)源物質(zhì)和外源物質(zhì)的代謝與轉(zhuǎn)化。在昆蟲中約有100個(gè)左右的P450基因，它們的作用廣泛，昆蟲對殺蟲劑有抗藥性和對植物有毒物質(zhì)有耐受性是因?yàn)镻450基因能對異源物質(zhì)有代謝作用。此外P450還參與了昆蟲體內(nèi)兩大激素保幼激素、蛻皮激素的合成與代謝。
　　本研究以褐飛虱作為研究對象，通過篩選基因組及轉(zhuǎn)錄組，共鑒定到68條

2、P450序列。著重對CYP2亞家族進(jìn)行了功能分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示CYP18A1、CYP304H1基因在褐飛虱的整個(gè)若蟲期內(nèi)均有表達(dá)，且表達(dá)量隨齡期逐漸升高，但CYP303A1基因則與前兩個(gè)基因相反，整個(gè)若蟲期內(nèi)均有表達(dá)，且表達(dá)量隨齡期逐漸降低。這三個(gè)基因在褐飛虱的成蟲體內(nèi)表達(dá)量不高;CYP18A1基因在褐飛虱的翅芽中表達(dá)量最高，其次是卵巢，體壁。CYP304H1基因在褐飛虱的脂肪體中表達(dá)量最高，其次是唾液腺。CYP303A1

3、在體壁和翅芽中表達(dá)量非常高。對5齡第一天的若蟲進(jìn)行顯微注射dsC YP18A1、dsCYP304H1、dsCYP303A1，mRNA可被有效下調(diào)，褐飛虱5齡若蟲的體壁以及蛻皮過程均呈現(xiàn)不同程度的畸形表型，且干擾這三個(gè)基因都會使褐飛虱致死;對這三個(gè)基因干擾分別干擾3齡、4齡、5齡的褐飛虱若蟲，統(tǒng)計(jì)三個(gè)齡期死亡率，結(jié)果顯示三個(gè)基因?qū)诛w虱的不同齡期均致死。通過CYP304H1轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，克隆CYP304H1基因片段大小為522bp，可編碼含