一些重要蟲生真菌的分子系統(tǒng)學研究.pdf

1、中國科學技術(shù)大學博士學位論文一些重要蟲生真菌的分子系統(tǒng)學研究姓名：黃勃申請學位級別：博士專業(yè)：細胞分子生物學指導教師：李振剛樊美珍2001.6.1GenBank中查詢得到的其它球孢自僵菌的ITs】一58s—JTs2rDNA區(qū)域序列，構(gòu)建了球孢自僵菌的系統(tǒng)發(fā)育樹，從而確認了球孢蟲草無性型在球孢白僵菌復合種的地位。在第四部分，用9個引物對國內(nèi)最有爭議的傳統(tǒng)名貴藥用真菌冬蟲夏草(cD—ycPpss擁P”5如)及其四種假定的無性型進行RAPD擴

2、增，發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草和中國被毛孢r脅rs“fP，ksmP”5如)DNA指紋圖譜相似率高達913％，而和其它三種假定的無性型相似率僅在28—358％，從而確認了冬蟲夏草無性型就是中國被毛孢，同時否定中國擬青霉(P口ecf，o用ycPJ妨fPHj打)、中國金孢霉(c^砂sD印Drf“珊J加PnsP)和蟲生簇孢(印D，omr肛加sPcfDr“m)是其無性型。這表明可用RAPD指紋圖譜來證實蟲草有性型和無性型的關(guān)系。在第五部分中第一章，以采自中國的

3、戴氏蟲草，戴氏綠僵菌，金龜子綠僵菌小孢變種(M口”括Dp，括Pvar口H婦op，蛔e)各l株為材料，擴增其子實體株或標本的ITsl—58s—ITs2rDNA區(qū)域，并進行克隆和序列分析。綜合分析GenBank中金龜子綠僵菌各變種及不同菌株的ITsl一58s—ITs2rDNA序列數(shù)據(jù)，表明戴氏綠僵菌應視為金龜子綠僵菌小孢變種的異名。戴氏蟲草和原戴氏綠僵菌的ITsl—58s—ITs2rDNA序列完全一致，表明金龜子綠僵菌小孢變種的有性型就是戴

4、氏蟲草。同時也提出了通過對基因進行序列測定的方法是確定蟲草和其無性型關(guān)系的有效和可行的分子方法。在其第二章中，也雙向測定了柱孢綠僵菌(M糾，f“dr。印Drne)、綠色野村菌近似種(^，0MI，口P口nrvfrf如，“s)及萊氏野村菌(Ⅳrf膪yf)ITsl—58s—ITs2rDNA區(qū)域序列，為柱孢綠僵菌和綠色野村菌近似種正確歸屬提供了新的分子依據(jù)；并對綠色野村菌進行了新組合，并對野村菌屬的存在提出疑議。在第六部分，首先對來自不同地理來

5、源和不同寄主的13株粉擬青霉∽向，抽Ds“s)和其他3種擬青霉及1株球孢白僵菌進行RApD分析，從RAPD擴增結(jié)果可知粉擬青霉種內(nèi)具豐富的遺傳多樣型。RAPD擴增指紋圖譜能有效地分辯不同菌株的基因型，可用于監(jiān)測生防效果的菌株示蹤。聚類分析結(jié)果表明種間的遺傳差異要明顯大于種內(nèi)的差異。菌株間差異和寄主不相關(guān)。同時，又雙向測定和注冊了20株粉擬青霉ITsl一58s—ITs2rDNA區(qū)域序列，確定了粉擬青霉正確的ITS序列，證明了韓國學者測定的

6、粉擬青霉ITs序列實為細腳擬青霉的序列。通過序列比較發(fā)現(xiàn)韓國三株未定名的擬青霉菌株(KAcc40219、KACc4022l、KAcc40222)實為粉擬青霉?；诒狙芯繕?gòu)建的分子系統(tǒng)樹推斷其有性型可能是一種蟲革。證實粉擬青霉的的起源是單源的，發(fā)現(xiàn)其菌株的ITs的多態(tài)性，在同一地區(qū)的菌株其ITs變異也較大。ITs序列的證據(jù)表明粉擬青霉菌株間差異和地理來源及寄主均無相關(guān)性。在第七部分中，新增加了擬青霉種或變種ITsl一58s—ITS2rDN