不同傳毒能力灰飛虱群體的mRNA差異分析.pdf

1、水稻條紋病毒(Ricestripevirus,RSV)引起的水稻條紋葉枯病是東亞水稻的重要重要病害之一，由介體灰飛虱(Laodelphaxstriatellus)以持久性方式經(jīng)卵傳播。本文通過構(gòu)建對(duì)RSV傳毒能力差異明顯的兩個(gè)灰飛虱群體，并利用mRNA差異顯示(differentialdisplayRT-PCR，DDRT-PCR)技術(shù)分析了這兩個(gè)群體之間的基因差異，以期探討灰飛虱傳播RSV的分子機(jī)制。 從云南RSV病區(qū)采集灰飛虱

2、，通過連續(xù)多代的人工篩選，構(gòu)建了對(duì)RSV親和性差異顯著的兩個(gè)灰飛虱群體。經(jīng)生物學(xué)接種鑒定高親和性灰飛虱群體的發(fā)病率從F0代的16.4％上升到F2代的93.0％，F(xiàn)3到F7代都維持在90.0％左右。低親和性灰飛虱群體的發(fā)病率則一直維持在1％-2.5％。高親和性的群體在經(jīng)過3代無人工選擇壓力后仍可保持90％以上的發(fā)病率。說明構(gòu)建的高親和性群體不僅具有很高的帶毒率而且具有較好的遺傳穩(wěn)定性，這樣一個(gè)群體對(duì)于傳毒機(jī)制的研究、RSV致病性分化研究和

3、品種抗性分析都具有重要意義。 運(yùn)用DDRT-PCR技術(shù)篩選高低親和性灰飛虱群體差異基因，結(jié)果表明在8條隨機(jī)引物中有4條能擴(kuò)增出較好的差異條帶，差異片段重?cái)U(kuò)增效果也比較單一。這些隨機(jī)引物共篩選出差異條帶35條，挑選了其中差異明顯、重?cái)U(kuò)增效果好的6條進(jìn)行了RNA斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證。結(jié)果表明其中4個(gè)片段為陽性，對(duì)陽性片段克隆測(cè)序、同源性比較。得知DD2序列為高親和性灰飛虱群體所特有，該序列與人類5-羥色胺受體1D(HTR1D)部分基因同源性