帶毒與不帶毒灰飛虱唾液腺差異表達蛋白對介體取食行為和傳毒率的影響.pdf

1、灰飛虱是Laodelphax striatellus是亞洲稻區(qū)水稻上的重要害蟲，可傳播水稻條紋葉枯病毒（Rice stripe virus，RSV）造成水稻條紋葉枯病的流行。RSV隸屬于纖細病毒屬，主要由灰飛虱以持久、循回增殖型方式傳播。唾液腺是RSV傳播需要克服的屏障之一，而RSV克服唾液腺屏障的機制尚缺乏研究。前期的研究發(fā)現(xiàn)，帶毒灰飛虱唾液腺中α-亞基-ATP合酶(ATP synthase subunit alpha)、線粒體內(nèi)膜移

2、位酶(Mitochondrial import inner membranetranslocase)、蘋果酸脫氫酶(NADP-dependent malic enzyme)、微管蛋白-α-2(Tubulinalpha-2)、泛素-60s核糖體L40前體(Ubiquitin-60S ribosomal protein L40 precursor)以及電壓依賴型陰離子通道蛋白(Voltage-dependent anion-selectiv

3、e channel，VDAC)等6個蛋白的表達水平顯著高于無毒灰飛虱唾液腺;帶毒灰飛虱唾液腺中前5個蛋白基因的表達水平亦顯著高于不帶毒灰飛虱。本論文研究了電壓依賴型陰離子通道蛋白的氨基酸全長序列及基因表達，并用RNA干擾研究了上述6個唾液腺差異蛋白基因對介體取食行為和傳毒率的影響。主要結果如下:
　　(1)利用RACE技術，從攜帶RSV的灰飛虱體內(nèi)成功擴增出全長為1464bp的電壓依賴型陰離子通道蛋白核苷酸序列。將全長核苷酸序列提

4、交到NCBI的GenBank數(shù)據(jù)庫中，命名為LsVDAC。采用實時定量PCR的方法對LsVDAC基因表達進行相對定量，結果發(fā)現(xiàn)帶毒灰飛虱唾液腺和全身中LsVDAC基因的表達均顯著上調(diào)。與不帶毒灰飛相比，帶毒灰飛虱唾液腺中LsVDAC基因的相對表達量提高了49.2％;灰飛虱蟲體中LsVDAC基因的相對表達量提高了6.1％。
　　(2)采用RNAi法研究了α-亞基-ATP合酶基因(LsATP)、線粒體內(nèi)膜移位酶基因(LsMIT)、蘋果

5、酸脫氫酶基因(LsNADP)、微管蛋白-α-2基因(LsTUB)、泛素-60s核糖體L40前體基因(LsUBI)以及電壓依賴型陰離子通道蛋白基因(LsVDAC)等6個基因對灰飛虱取食行為和傳毒率的影響。結果顯示:LsATP干擾后，灰飛虱在取食過程中口針在木質(zhì)部取食的持續(xù)時間((0.23±0.19) min)顯著低于對照組（(1.74±0.71)min);LsMIT干擾后，灰飛虱口針在韌皮部細胞外移動的時間較對照提高54.9％; LsNA

6、DP干擾后，灰飛虱在木質(zhì)部持續(xù)取食時間(0.04±0.03 min)顯著低于對照組（（1.74±0.71）min);干擾LsTUB和LsUBI對灰飛虱的行為參數(shù)無明顯影響;LsVDAC干擾后，灰飛虱口針在韌皮部細胞外移動的時間較對照增加48.3％;在木質(zhì)部取食的持續(xù)時間（（0.17±0.10）min）顯著短于對照（（1.74±0.71）min）。取食dsATP、dsTUB及dsUBI后，處理組灰飛虱的傳毒率與相應的對照無顯著差異，表明這