葡萄糖、孕酮及鈣離子載體對牛精子體外獲能、受精及早期胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、本文在總結(jié)前人研究的基礎(chǔ)上，通過在獲能液中添加不同濃度的葡萄糖、孕酮及鈣離子載體，應(yīng)用體外培養(yǎng)技術(shù)對牛精子體外獲能作了進(jìn)一步研究，通過對頂體反應(yīng)、超激活、活率和早期胚胎發(fā)育率的觀察，篩選出獲能液中最適葡萄糖和孕酮濃度，確定出最佳的鈣離子載體濃度和作用時間組合；旨在建立健全一套完整的體外獲能技術(shù)體系，為胚胎工程和生產(chǎn)實(shí)踐提供技術(shù)操作規(guī)程和方法，為理論研究積累資料，研究結(jié)果如下： 1.葡萄糖是精子獲能和維持超激活運(yùn)動的主要能源物質(zhì)，

2、其代謝過程中產(chǎn)生的活性氧在牛精子體外獲能、受精過程中起重要作用，高濃度(超過9.15mM)葡萄糖有利于獲能的完成；但是對早期胚胎發(fā)育不利，對早期胚胎發(fā)育來說其最適添加量為6.10mM，此時的囊胚率最高。 2.孕酮是重要的生殖激素，在生殖過程中起重要作用，本試驗表明單獨(dú)添加孕酮不能誘導(dǎo)牛精子體外獲能；孕酮只能誘導(dǎo)獲能精子發(fā)生頂體反應(yīng)，而且有一個劑量依賴關(guān)系，在本試驗中以1μg/ml的添加效果最好。 3.孕酮的添加對精子活率

3、有一定的影響，當(dāng)孕酮濃度超過1μg/ml、作用時間超過4h時，精子活率下降；本試驗還表明獲能液中添加孕酮，無論劑量多少，對胚胎體外發(fā)育無明顯的促進(jìn)作用。 4.鈣離子載體是誘導(dǎo)牛精子獲能的重要物質(zhì)之一，存在一個處理濃度-時間閾值，本試驗的結(jié)果表明最佳處理濃度和時間組合是0.1μM處理2min或者0.15μM處理0.5min，此時的囊胚率最高。 5.Ca2+在牛精子體外獲能過程中起重要作用，鈣離子載體誘導(dǎo)牛精子獲能是通過Ca