版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的:近端小管起始于腎小球的尿極,是腎小管的起始段,具有較強(qiáng)的重吸收功能,原尿中的全部葡萄糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、65%的鈉離子和水、50%的尿素都在此段吸收,這種重吸收功能依賴于近端小管的上皮結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)運(yùn)功能。腎近端小管也是腎缺血、缺氧及高糖應(yīng)激中易受損傷也易被修復(fù)的節(jié)段。傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)按近端小管走行,將其分為曲部和直部;按超微結(jié)構(gòu)的不均一性,將近端小管分為S1、S2和S3三段,這種節(jié)段性的確立是建立在對(duì)大鼠、兔和人腎近端小管的超微結(jié)構(gòu)體視學(xué)分
2、析基礎(chǔ)上的,并且在功能研究中也得到相對(duì)應(yīng)的節(jié)段。很多小鼠近端小管的研究直接沿用這種節(jié)段性加以分析,但是,這種節(jié)段性已被證明有種屬差異。目前尚缺乏對(duì)小鼠近端小管節(jié)段性的系統(tǒng)研究。本實(shí)驗(yàn)利用計(jì)算機(jī)輔助的三維重建技術(shù),以小鼠腎組織連續(xù)切片形成的系列配準(zhǔn)的顯微圖像為基礎(chǔ),結(jié)合超微結(jié)構(gòu)體視學(xué)的方法,分別對(duì)起源于皮質(zhì)三個(gè)水平的腎單位(SN、MN和JN)的近端小管亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),如內(nèi)吞體、線粒體、微絨毛等,以及上皮的高度、管徑和管壁的容積等參數(shù)進(jìn)行研究,
3、探討其管壁超微結(jié)構(gòu)的變化規(guī)律及轉(zhuǎn)運(yùn)能力,旨在為腎臟生理機(jī)制及腎臟病的病變過程分析提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。
實(shí)驗(yàn)方法:
1、樹脂包埋連續(xù)切片的制備腎組織取自三只體重為25 g的C57/BL/6J小鼠,腹主動(dòng)脈逆流固定(1%戊二醛和0.1 mol/L的二甲砷酸鈉緩沖液配制,PH值7.4)。垂直于腎長(zhǎng)軸取組織塊,鋨酸后固定2h,梯度酒精丙酮脫水后樹脂812包埋。采用超薄切片機(jī)及鉆石刀進(jìn)行半薄切片,從腎被膜到腎外髓外帶,共獲
4、2.5μm厚的連續(xù)切片720張,通過甲苯胺藍(lán)染色顯示組織微細(xì)結(jié)構(gòu)。
2、顯微圖像獲取與配準(zhǔn)應(yīng)用“計(jì)算機(jī)-顯微鏡-數(shù)碼相機(jī)”圖像采集系統(tǒng)(Olympus AX70顯微鏡;Olympus DP50相機(jī),東京,日本),對(duì)連續(xù)切片進(jìn)行顯微鏡下拍照。最終獲得的圖像大小為2596×1889像素,每個(gè)像素相當(dāng)于1.16μm×1.16μm。圖像配準(zhǔn)過程在計(jì)算機(jī)Windows平臺(tái)上操作。其原理是,通過比較相鄰兩幅圖像內(nèi)生理對(duì)應(yīng)點(diǎn)的像素灰度值
5、的相似性來確定每個(gè)圖像平移及旋轉(zhuǎn),使其達(dá)到生理空間的一致。其過程是,首先得出相鄰兩幅圖的相對(duì)變換值(平移距離和旋轉(zhuǎn)角度),再通過求相對(duì)變換值的相加函數(shù)得出系列圖像中的每幅圖的絕對(duì)變換值,從而實(shí)現(xiàn)圖像配準(zhǔn)。
3、計(jì)算機(jī)輔助的近端小管數(shù)字追蹤對(duì)成鼠腎單位腎小管進(jìn)行數(shù)字追蹤,追蹤是通過C語言設(shè)計(jì)的程序在計(jì)算機(jī)Linux平臺(tái)上實(shí)現(xiàn)的。近端小管的追蹤起于腎小球尿極,終止于近端小管直部和髓袢降支細(xì)段上皮移行部。本實(shí)驗(yàn)追蹤了3只小鼠15
6、0條近端小管,追蹤過程自動(dòng)生成一個(gè)數(shù)據(jù)文件,記錄追蹤小管走行的空間坐標(biāo)?;诖俗鴺?biāo)集,近端小管走行的毗鄰關(guān)系分析,以及小管長(zhǎng)度測(cè)量等得以實(shí)現(xiàn)。小管長(zhǎng)度的測(cè)量運(yùn)用歐幾里德算法(n∑i=2√(xi-xi-1)2+(yi-yi-1)2+(zi-zi-1)2,即,累加沿近端小管走行的每?jī)蓚€(gè)連續(xù)點(diǎn)的距離,得出沿近端小管走行任意兩點(diǎn)之間的距離。
4、體視學(xué)分析從腎小球開始到近端小管末端沿小管縱軸每隔300-400μm取切片獲得超微結(jié)構(gòu)
7、圖像,采用點(diǎn)計(jì)數(shù)法,利用10mm網(wǎng)格測(cè)試系統(tǒng),在近端小管發(fā)放大倍數(shù)15600×的電鏡圖像上測(cè)細(xì)胞內(nèi)吞體、溶酶體、線粒體等的體積密度。在2100×的電鏡圖像上測(cè)微絨毛長(zhǎng)度、上皮高度、小管內(nèi)外徑等參數(shù)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
小鼠近端小管全程具有較為一致的超微結(jié)構(gòu),即,細(xì)胞游離面被覆長(zhǎng)而致密的微絨毛,頂端細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有許多大小不一的內(nèi)吞體和頂端致密小管,在細(xì)胞頂端和細(xì)胞核之間有豐富的溶酶體和散在的線粒體,核下方和基底膜之間有垂
8、直排列的質(zhì)膜內(nèi)褶,褶之間可見有桿狀的線粒體。在近端小管的起始部,以及直部與細(xì)段移行處,細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化明顯。近端小管曲部細(xì)胞的頂端有大量的脂滴和溶酶體,并且在起源于SN和MN的近端小管距腎小球900到2400μm段中,觀察到細(xì)胞內(nèi)存在有成層或者不均勻的高電子密度的溶酶體,但在JN中沒有觀察到。
形態(tài)計(jì)量學(xué)研究結(jié)果顯示,小鼠近端小管刷狀緣的高度不同于大鼠,全程變化不大,平均值約為2.7μm。管腔直徑?jīng)]有規(guī)律的節(jié)段性變化,平均值為
9、22μm。SN和MN的近端小管細(xì)胞中,包括溶酶體的內(nèi)吞體的體密度在近端小管曲部的中部有一個(gè)高峰為4%,在近端小管最后1000μm降低到2%,雖然沿近端小管有微小波動(dòng),但是沒有看到像大鼠和人近端小管的節(jié)段性。SN、MN和JN的近端小管細(xì)胞中的線粒體的體密度平均值為44%,全程較為一致,沒有發(fā)現(xiàn)大的節(jié)段性變化。
結(jié)論:
超微結(jié)構(gòu)及體視學(xué)分析表明,該種屬小鼠腎近端小管在溶酶體和線粒體的體密度、上皮高度、微絨毛高度等
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 小鼠腎近端小管與出球微動(dòng)脈的三維重建.pdf
- 脊髓損傷后骨代謝形態(tài)改變的髂骨形態(tài)計(jì)量學(xué)研究
- 近紅外光譜新型化學(xué)計(jì)量學(xué)建模方法研究.pdf
- 國(guó)人脛骨近端形態(tài)學(xué)測(cè)量與研究.pdf
- 《金融計(jì)量學(xué)》教案
- 髖部骨折股骨頸部的骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的臨床研究.pdf
- 人腦基底神經(jīng)節(jié)微血管的形態(tài)計(jì)量學(xué)研究.pdf
- 化學(xué)計(jì)量學(xué)基礎(chǔ)算法研究.pdf
- 哌嗪雌酚酮對(duì)生長(zhǎng)期去卵巢小鼠脛骨骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響
- 龍眼文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)研究.pdf
- 從世界頂級(jí)計(jì)量學(xué)期刊看信息計(jì)量學(xué)和科學(xué)計(jì)量學(xué)的現(xiàn)狀及發(fā)展
- 肝豆?fàn)詈俗冃阅I臟近端小管損害的研究.pdf
- 小鼠腎小體發(fā)生與發(fā)育的形態(tài)學(xué)研究.pdf
- 強(qiáng)骨飲對(duì)去卵巢大鼠骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 網(wǎng)站網(wǎng)絡(luò)計(jì)量學(xué)實(shí)證研究
- 現(xiàn)代經(jīng)濟(jì)計(jì)量學(xué)建立簡(jiǎn)史.pdf
- 中藥在線近紅外質(zhì)量分析中的化學(xué)計(jì)量學(xué)算法研究及應(yīng)用.pdf
- 下肢穿支血管的形態(tài)計(jì)量學(xué)分析.pdf
- 《金融計(jì)量學(xué)》習(xí)題1答案
- 交通醫(yī)學(xué)發(fā)展的科學(xué)計(jì)量學(xué)研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論