應(yīng)用“微流控芯片”技術(shù)探討PQQ與bFGF促進(jìn)雪旺細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　本研究通過(guò)設(shè)計(jì)和制作新型“微流控芯片”(Microfluidic chips)，在體外三維流動(dòng)性微環(huán)境中，探討細(xì)胞因子PQQ單獨(dú)和聯(lián)合bFGF對(duì)SD大鼠雪旺細(xì)胞(Schwanncell，SCs)的增殖作用，并對(duì)比其與傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)平臺(tái)的異同。
　　方法:
　　(1)提取3-5天SD大鼠乳鼠坐骨神經(jīng)，解剖顯微鏡下剝除神經(jīng)外膜和纖維膜，雙酶消化法提取雪旺細(xì)胞并進(jìn)行培養(yǎng)和擴(kuò)增，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和計(jì)數(shù)，應(yīng)用免

2、疫組化熒光染色技術(shù)行雪旺細(xì)胞鑒定;
　　(2)設(shè)計(jì)和制作了兩種微流控芯片，并分別對(duì)其可用性進(jìn)行測(cè)定和檢驗(yàn);
　　(3)將提純后培養(yǎng)的第3代雪旺細(xì)胞與膠原混合后置于單通道微流控芯片內(nèi)，微量泵內(nèi)加入PQQ生物因子，觀察1周后記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并計(jì)算其增殖率，與二維環(huán)境下普通培養(yǎng)進(jìn)行比較。
　　(4)將提純后培養(yǎng)的第3代雪旺細(xì)胞與膠原混合后置于11通道濃度梯度微流控芯片內(nèi)，芯片入口端同時(shí)泵入PQQ和bFGF生物因子，分別記錄

3、1、2、3、4周時(shí)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并計(jì)算其增殖率，并與二維環(huán)境下普通培養(yǎng)進(jìn)行比較。
　　結(jié)果:
　　(1)從3-5天SD大鼠中提取的雪旺細(xì)胞，提純后細(xì)胞生長(zhǎng)情況良好，倒置顯微鏡下雪旺細(xì)胞為雙極長(zhǎng)梭形，呈尖對(duì)尖或并排排列，細(xì)胞較多時(shí)亦可聚集成簇，胞核為卵圓形，純度可達(dá)95％以上，S-100免疫組化熒光染色鑒定證明為大鼠雪旺細(xì)胞;
　　(2)制作的微流控芯片密閉性良好，濃度值經(jīng)檢測(cè)后與理論值基本相符，可以被應(yīng)用于細(xì)胞因子篩選

4、實(shí)驗(yàn);
　　(3) PQQ單獨(dú)促進(jìn)雪旺細(xì)胞增殖時(shí)，在100nmol/L PQQ組具有最大細(xì)胞數(shù)量;
　　(4) PQQ聯(lián)合bFGF促進(jìn)雪旺細(xì)胞增殖時(shí)在30ng/mlPQQ和7ng/ml bFGF具有最大增殖效應(yīng)。
　　結(jié)論:一定濃度的PQQ可促進(jìn)大鼠雪旺細(xì)胞增殖，但濃度過(guò)高反而抑制增殖;一定濃度組合的PQQ和bFGF對(duì)大鼠雪旺細(xì)胞可協(xié)同產(chǎn)生最大的增殖效應(yīng);微流控芯片技術(shù)可以用于周圍神經(jīng)組織工程領(lǐng)域，具有廣闊的應(yīng)用前景。