不同施肥水平下旱地土壤細(xì)菌群落多樣性的RFLP分析.pdf

1、土壤微生物生長(zhǎng)有賴于土壤的肥力水平和環(huán)境狀況，微生物和土壤肥力之間具有相互促進(jìn)作用和協(xié)同發(fā)展的關(guān)系。土壤微生物中，以細(xì)菌的種類和數(shù)量最多。通過對(duì)土壤細(xì)菌多樣性的研究，可以加深人們對(duì)細(xì)菌和所處土壤環(huán)境間相互關(guān)系的理解和認(rèn)識(shí)。 本文以西北地區(qū)土墊旱耕人為土(Earth-cumuli-Orthic Anthrosols)為研究對(duì)象，自然風(fēng)干后研磨過篩，裝盆種植小白菜進(jìn)行拔肥。40天后取出土壤，再次風(fēng)干后研磨過篩，測(cè)其理化性質(zhì)。對(duì)拔肥后

2、的土壤進(jìn)行施肥處理：處理1(F1)為1/2倍正常施肥量，處理2(F2)為正常施肥量，處理3(F3)為5倍正常施肥量，以不施肥處理作為對(duì)照(CK)。氮肥、磷肥和鉀肥分別選用尿素、KH2PO4和KCI?？刂仆寥浪譃樽畲竺艹炙康?0％，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)15天。通過直接法提取土壤微生物總DNA，采用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)其進(jìn)行純化，以除去腐殖酸等雜質(zhì)。采用細(xì)菌16S rDNA通用引物對(duì)(63F/1387R)對(duì)細(xì)菌16S rDNA片

3、段進(jìn)行擴(kuò)增，并將擴(kuò)增片段與pMD19-T載體進(jìn)行連接反應(yīng)，轉(zhuǎn)入大腸桿菌JM109中，通過藍(lán)白斑篩選挑取陽性克隆子，建立土壤細(xì)菌16S rDNA克隆文庫。通過菌落PCR方法，隨機(jī)挑取約200個(gè)陽性克隆，用pMD19-T載體通用引物M13重新擴(kuò)增插入的16S rDNA片斷，將純化后的菌落PCR產(chǎn)物分別用HhaⅠ和RsaⅠ兩種限制性內(nèi)切酶消化。 利用α多樣性的測(cè)度分析RFLP的結(jié)果，聚類分析以細(xì)菌分布之間的Bray-Curtis相異性

4、測(cè)度系數(shù)為距離指標(biāo)，用非加權(quán)平均配對(duì)法(UPGA)在NTsys 2.10統(tǒng)計(jì)軟件上進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。獲得如下研究結(jié)果： 1.4種處理土壤分別得到146、133、187、170個(gè)酶切類型，庫容值分別為0.2527、0.3480、0.1845、0.1452。從本試驗(yàn)的樣方特征來說，具有一定代表性，可以用來描述土壤中數(shù)量龐大的細(xì)菌家族的構(gòu)成特征。 2.采用α多樣性的測(cè)度對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，4種處理得到的Menhinck指數(shù)分別為1

5、0.705、8.3119、13.029、12.465；Pielou均勻度指數(shù)為0.9483、0.8545、1.0003、0.9905。種間相遇機(jī)率指數(shù)(PIE)和物種豐富度等重要指數(shù)，其數(shù)值由大至小均為適量施肥、過量施肥、對(duì)照、低量施肥，說明適量施肥處理土壤中微生物物種豐富度最高，優(yōu)勢(shì)度最低，種類分布均勻，構(gòu)成功能體系較完善的微生物群落，而多個(gè)多樣性指數(shù)的選擇確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析的全面性。 3.測(cè)序結(jié)果可知，大多數(shù)菌種為不可培養(yǎng)菌