鉻污染土壤修復(fù)過程中土壤細(xì)菌群落多樣性RFLP分析.pdf

1、微生物的多樣性可以反映出其生存環(huán)境的生態(tài)情況，因此土壤微生物多樣性是土壤環(huán)境質(zhì)量的重要指標(biāo)。研究土壤生物修復(fù)過程中土壤細(xì)菌群落的變化，對探討環(huán)境修復(fù)的生物學(xué)機(jī)理具有重要的理論指導(dǎo)意義。 采用淹水培養(yǎng)后的模擬鉻污染土壤為供試材料，污染土壤修復(fù)處理方式為淹水處理10d(S2)，添加Fe(OH)3并淹水10d(S3)及20d(S4)，以土壤自然淹水處理為對照(S1)。采用三種方式直接提取土壤中總細(xì)菌DNA，利用細(xì)菌專一引物63F/13

2、87R．克隆細(xì)菌16SrDNA片段。將擴(kuò)增片段與pMD19-T載體進(jìn)行連接反應(yīng)，轉(zhuǎn)入大腸桿菌JM109中，建立土壤細(xì)菌16SrDNA克隆文庫。利用菌落PCR方法，通過藍(lán)白斑篩選隨機(jī)挑取約200個陽性克隆子，用pMD19-T載體通用引物M13重新擴(kuò)增插入的16SrDNA片斷。將純化后的菌落PCR產(chǎn)物用Rsa Ⅰ消化，酶切產(chǎn)物經(jīng)8％丙烯酰胺凝膠電泳分離，銀染顯色，形成了各個克隆文庫的RFLP圖譜。根據(jù)RFLP圖譜得到細(xì)菌種群多樣性數(shù)據(jù)，采用

3、a和β多樣性測度統(tǒng)計(jì)分析不同處理土壤細(xì)菌多樣性指數(shù)。采用Hha Ⅰ，將S3和S4中突出的優(yōu)勢細(xì)菌群落16SrDNA再次酶切。選取仍然呈優(yōu)勢的克隆子測定序列。將測序結(jié)果提交NCBI經(jīng)BLAST比對，得到同源序列及種屬信息。采用ClustalX和Mega3.1構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，分析優(yōu)勢細(xì)菌種群間的遺傳關(guān)系。得出以下主要結(jié)論： 1.不同處理土壤分別得到123(S1)、120(S2)、97(S3)、69(S4)個酶切類型，單克隆在不同處理

4、中的比例分別為45.08％、44.98％、34.67％、23.40％。優(yōu)勢細(xì)菌數(shù)目分別為7、5、11、11個，特別是S4中出現(xiàn)了兩種比例大于10％的OTU類型。 2.不同處理土壤的細(xì)菌多樣性指數(shù)：Shannon—Wiener指數(shù)(H')分別為4.616，4.588，4.091和3.589；Gini指數(shù)分別為0.9873，0.9868，0.9708和0.9492；豐富度(dMa)分別為23.18，22.61，12.98和8.13；