膠原-殼聚糖—明膠微球支架緩釋三七皂甙Rg1促血管化研究.pdf

1、目的:
　　探索中藥單體三七皂甙Rg1對血管內(nèi)皮細(xì)胞生物活性影響及機(jī)制，為其促血管化、協(xié)同治療提供依據(jù)。構(gòu)建有效的復(fù)合三七皂甙Rg1的膠原/殼聚糖-明膠微球支架緩釋體系，評價(jià)與探索三七皂甙Rg1在促進(jìn)組織工程皮膚血管化中的作用及相關(guān)機(jī)制，為組織工程促血管化策略提供新的思路。
　　方法:
　　各種急、慢性損傷造成的皮膚缺損是亟待有效解決的重大臨床問題之一。組織工程化皮膚為皮膚創(chuàng)面的修復(fù)和愈合提供了一嶄新的治療途徑，但是目

2、前各種組織工程化皮膚移植存活率較低，其中一個(gè)主要原因是組織工程化皮膚移植后血管化速度較慢。因此尋求有效促進(jìn)組織工程移植物血管化的方法尤為重要。三七作為一種常見的活血化瘀中藥具有良好的促血管生成作用，這一作用主要是由其有效成分三七皂甙Rg1主導(dǎo)的。前期研究證實(shí)膠原/殼聚糖支架具有良好的機(jī)械支持作用和促進(jìn)組織、血管長入的作用，而明膠微球作為一種緩釋載體技術(shù)已經(jīng)非常成熟。因此我們首先通過對內(nèi)皮細(xì)胞增殖和凋亡，遷移，小管形成的作用，流式細(xì)胞術(shù)檢

3、測細(xì)胞周期和凋亡率，HUVEC細(xì)胞的VEGF表達(dá)探索三七皂甙Rg1對HUVEC細(xì)胞血管生成的影響及機(jī)制。為了使Rg1能最好的應(yīng)用于組織工程，我們構(gòu)建了緩釋三七皂甙Rg1的膠原/殼聚糖-明膠微球(CC-GMS)支架，并通過體外實(shí)驗(yàn)對這種支架的微觀形貌、緩釋性能以及緩釋出的Rg1對HUVEC細(xì)胞增殖能力影響進(jìn)行評價(jià)。為進(jìn)一步表征緩釋Rg1的CC-GMS支架對血管化及誘導(dǎo)再生的影響，我們采用SD大鼠埋植實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，分別采用組織病理技術(shù)、免疫組化

4、和免疫熒光技術(shù)及分子生物學(xué)技術(shù)對組織反應(yīng)性和促血管化因子的表達(dá)進(jìn)行了評價(jià)。
　　結(jié)論:
　　三七皂甙Rg1有良好的促進(jìn)HUVEC細(xì)胞增殖，遷移，管形成作用。Rg1增加HUVEC細(xì)胞周期中G2/M期和S期的比例，并未引起內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。同時(shí)三七皂甙Rg1可上調(diào)HUVEC細(xì)胞VEGF表達(dá)。構(gòu)建的CC-GMS支架具有很好的組織相容性并能持續(xù)釋放活性的Rg1。構(gòu)建的緩釋Rg1的CC-GMS支架在體內(nèi)具有良好的促血管化作用，作為組織工