美洲南瓜(Cucurbit pepo)WMV-2抗性遺傳及分子標(biāo)記研究.pdf

1、近年來隨著南瓜的經(jīng)濟(jì)價(jià)值越來越被人們所重視，南瓜栽培面積不斷擴(kuò)大，南瓜病毒病危害日益加重，特別在高溫干旱年份發(fā)病尤為嚴(yán)重，給南瓜的生產(chǎn)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。病毒病可以通過蚜蟲以及機(jī)械方式傳播，藥劑防治成本高、效果差，并且污染果實(shí)和環(huán)境。因此培育抗病品種被認(rèn)為是最有效、可持續(xù)發(fā)展且對環(huán)境無污染的途徑。深入了解抗病毒病基因的遺傳機(jī)制，找出遺傳模式的信息，并能將抗病基因?qū)雰?yōu)良品種或通過對抗病品種的篩選采用雜交方式培育出優(yōu)良品種是很有必要的。而

2、分子標(biāo)記技術(shù)是抗性基因篩選和鑒定的最有用工具之一。
　　 本研究以美洲南瓜（Cucurbita pepo）抗病自交系‘0504’與感病自交系‘0223’雜交后自交所得的F2代分離群體為材料，采用分離群體分析法(Bulkedsegregant Analysis， BSA)，篩選與南瓜病毒病抗性基因連鎖的SSR分子標(biāo)記，進(jìn)行分子標(biāo)記輔助育種。主要結(jié)果如下:
　　 (1)采用RT-PCR方法鑒定南瓜病毒病的病原。根據(jù)已經(jīng)報(bào)道的

3、南瓜病毒外殼蛋白基因序列設(shè)計(jì)合成引物，以感病葉片和健康葉片總RNA為模板，進(jìn)行cDNA合成和PCR擴(kuò)增。從感病葉片中擴(kuò)增出約800 bp左右的特異性片段而健康葉片無此擴(kuò)增產(chǎn)物，對目標(biāo)特異性片段進(jìn)行測序，在Genbank上進(jìn)行核酸和氨基酸序列的比對分析，與西瓜花葉病毒-2號(hào)(WMV-2)的外殼蛋白基因序列的核苷酸序列同源性達(dá)95％，確定該南瓜病毒為WMV-2。
　　 (2)采用常規(guī)接種方法對父母本、F1和F2群體進(jìn)行人工接種鑒定，

4、結(jié)果顯示，F(xiàn)1代全部發(fā)病，在157株F2代植株中，有36株表現(xiàn)為抗病，121株表現(xiàn)為感病，經(jīng)過卡方檢測F2對該病毒的抗性分離情況基本上符合1∶3的分離比例。推測美洲南瓜對WMV-2抗性為隱性單基因控制。
　　 (3)利用適合南瓜的SSR分子標(biāo)記反應(yīng)體系，從352對來自于南瓜基因組的SSR引物對篩選出114對在雙親間表現(xiàn)出多態(tài)性的引物，多態(tài)性為32.4％;從60對與南瓜近緣的黃瓜SSR引物篩選出5對在雙親間表現(xiàn)出多態(tài)性的引物，多態(tài)

5、性為8％。
　　 (4)從F2代分離群體中選用高抗和高感的單株各10株分別構(gòu)成抗感基因池。利用SSR標(biāo)記和BSA法，從在親本間具有多態(tài)性的119對SSR引物中找到兩個(gè)與南瓜WMV-2抗性相關(guān)基因相連鎖的標(biāo)記（CMTm158和CMTm157），這兩個(gè)標(biāo)記通過對F2單株進(jìn)行驗(yàn)證，檢測F2抗病單株的基因型?；蛐丸b定結(jié)果:引物CMTm157與抗病基因間存在17株重組體，其中14株擴(kuò)增出雜合體帶型，3株為感病帶型;引物CMTm158共鑒