西瓜枯萎病生理小種2抗性基因的分子標記研究.pdf

1、西瓜枯萎病是由尖孢鐮刀菌西瓜?；?Fusarium oxysporum f．sp．nuveum)侵染所致的土傳維管束病害，為西瓜的主要病害之一，世界各地均有發(fā)生，給生產(chǎn)帶來了極大的損失。目前已發(fā)現(xiàn)西瓜枯萎病有三個生理小種，即0、1和2。與其他兩個生理小種相比，生理小種2更具侵染性。同時，國內(nèi)外已公認Charleston Gray抗0號生理小種，Calhoun Gray抗1號生理小種，但至今生產(chǎn)上仍無生理小種2的抗性品種。野生西瓜材料P

2、I296341是國際上公認的一份抗枯萎病三個生理小種的抗源，因此該野生西瓜資源的利用將會提高現(xiàn)有品種的抗性。本項研究以野生西瓜(Citruklus lanatusVar．tsamma)種質(zhì)PI296341的枯萎病生理小種2的抗性為主要研究對象，利用RAPD(Random ampilied polymorphic DNA)技術(shù)，尋找獲得與其抗性基因的連鎖分子標記。為高效利用西瓜野生種質(zhì)的優(yōu)良抗性性狀提供了可能，也為最終定位與克隆西瓜野生種

3、質(zhì)的抗性基因打下良好基礎(chǔ)，試驗取得的主要結(jié)果如下： 1.對影響RAPD擴增穩(wěn)定性的諸多因子進行了較為全面的分析和深入細致的實驗探討，證明模板DNA純度、Mg2+濃度和TaqDNA聚合酶是影響RAPD擴增穩(wěn)定性的幾個關(guān)鍵因子。最終確定在25ul反應(yīng)體系中：2.0mv的Mg2+濃度、1單位的Taq酶用量、15ng模板DNA、dNTP終濃度為0.8mmol/L幾和引物終濃度0.15umol/L。 2.本實驗改良的CTAB提取方

4、法，可以獲得質(zhì)量較好的DNA，具有快速簡單實用、成本較低等優(yōu)點，且提高了功效。本實驗將RAPD-PCR分析程序的循環(huán)次數(shù)減少，所獲得的RAPD帶型無變化，整個反應(yīng)程序在PTC-200上僅需3.30個小時。 3.采用國際上公認的浸根法對西瓜抗病材料P1296341與感病材料M17，及其F2群體105個單株進行苗期抗枯萎病生理小種2鑒定結(jié)果顯示，抗病株70株，感病株35株，經(jīng)適合性測驗基本符合3∶1分離比例，說明其抗病性是由單顯性基

5、因所控制。 4.運用RAPD技術(shù)，采用混合分組分析方法(BSA)進行了西瓜野生種質(zhì)PI296341抗枯萎病生理小種2基因連鎖的分子標記研究。用630個隨機引物對所建的抗病/感病基因池進行分析，只有OPG13(5’CTCTCCGCCA3’)1個引物在兩基因池間檢測到多態(tài)性，即在抗病基因池中擴增出特異的530bpDNA片段，而在感病基因池中未擴增出相應(yīng)的DNA片段。用引物OPG13對F2群體的105個單株進行分析，與上述結(jié)果一致，而