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1、目的在本研究中,針對(duì)部分天然化合物的兩親性特征,我們將結(jié)合分子印跡技術(shù)(molecular imprinting technique,MIT),嘗試采用表面分子印跡策略來(lái)構(gòu)建一種對(duì)兩親性模板分子具有較高識(shí)別和結(jié)合的印跡聚合物(MIPNPs)。這一策略的優(yōu)點(diǎn)在于,對(duì)于兩親性的模板分子,采用反相微乳液聚合法制備聚合物的過(guò)程中,模板分子將傾向于停留在兩相界面(親水端嵌于材料內(nèi)部,疏水端暴露于表面),當(dāng)除去模板分子后,在MIPNPs的表面或近表
2、面則會(huì)留下與模板分子(親水部分)相同的“孔穴”。由于MIPNPs的識(shí)別位點(diǎn)位于聚合物表面,因此能夠有效地改善傳統(tǒng)方法中模板分子過(guò)度包埋和不易脫除等問(wèn)題,在實(shí)際應(yīng)用中更好的實(shí)現(xiàn)對(duì)模板分子的識(shí)別與分離。
方法與結(jié)果在本課題的第一部分研究中,我們將從銅綠假單胞菌細(xì)胞壁中得到的具有兩親性的脂多糖分子,作為模板分子,制備得到的脂多糖MIPNPs形態(tài)較為圓整,大小均一,分布均勻,平均粒徑為(38.31±2.13)nm,分散性P DI為(0
3、.112±0.102)。經(jīng)熒光偏振技術(shù)和微量熱泳動(dòng)技術(shù)的研究測(cè)定,與非印跡聚合物NIPNPs相比,制備所得的脂多糖MIPNPs對(duì)LPS表現(xiàn)出了較好的特異性結(jié)合能力。流式細(xì)胞技術(shù)研究顯示,銅綠假單胞菌對(duì)脂多糖 MIPNPs具有較好的攝取。在上述基礎(chǔ)上,我們構(gòu)建了銅綠假單胞菌小鼠腦膜炎模型,將包載熒光素的脂多糖MIPNPs以靜脈注射的方法注入模型小鼠體內(nèi),活體成像顯示,在模型小鼠的病灶部位(腦部)有較多的熒光分布,表明,脂多糖MIPNPs在
4、體內(nèi)對(duì)模板分子也具有較好的識(shí)別能力。
上述研究顯示,針對(duì)兩親性模板分子——脂多糖,由反相微乳液聚合法制備得到的結(jié)合位點(diǎn)位于材料表面的分子印跡聚合物,對(duì)模板分子在體內(nèi)外均表現(xiàn)出了良好的靶向識(shí)別能力,表明這種制備工藝和策略方法具有較好的可行性和研究成果。
在本課題的第二部分研究中,我們將人參中主要的兩親性化合物——人參皂苷,作為模板分子,來(lái)制備MIPNPs。研究中,以人參皂苷Rg5作為模板分子,采用反相微乳液聚合方法制備
5、得到的Rg5-MIPNPs,具有較好的粒徑分布,且對(duì)模板分子Rg5表現(xiàn)出了較高的親和力。我們用另一人參皂苷R1和具有相似結(jié)構(gòu)的甘草酸GA對(duì)Rg5-MIPNPs的選擇性進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果顯示,Rg5-MIPNPs僅對(duì)Rg5表現(xiàn)出了特異的結(jié)合性,而對(duì)同樣的兩親性分子R1和GA則沒(méi)有特異性吸附。在此基礎(chǔ)上,我們將制備得到的Rg5-MIPNPs進(jìn)一步制備得到凝膠柱,考察其對(duì)實(shí)際樣品的分離效果。結(jié)果顯示,以Rg5為模板分子制備并填充的凝膠柱,對(duì)Rg5
6、具有較好的特異性識(shí)別分離能力。
結(jié)論本課題研究針對(duì)部分天然化合物的兩親性,結(jié)合分子印跡技術(shù),采用表面分子印跡策略成功制備得到了對(duì)兩親性模板分子具有較高識(shí)別和結(jié)合的印跡聚合物。一方面,以脂多糖為模板,制備得到的脂多糖印跡聚合物,對(duì)模板分子在分子水平和細(xì)胞水平上均具有較高的特異性識(shí)別結(jié)合能力。初步實(shí)現(xiàn)了對(duì)目標(biāo)細(xì)菌的體外靶向作用以及體內(nèi)病灶部位的位點(diǎn)識(shí)別作用,為靶向遞藥系統(tǒng)提供了新的研究思路。另一方面以人參皂苷為模板,制備得到的人參
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