中樞神經(jīng)系統(tǒng)Akt信號(hào)通路參與大鼠乳腺癌骨轉(zhuǎn)移疼痛的研究.pdf

1、目的：
　　研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)Akt信號(hào)通路對(duì)大鼠乳腺癌骨轉(zhuǎn)移疼痛中的作用。觀察鞘內(nèi)注射Akt抑制劑GSK690693對(duì)脛骨癌痛大鼠痛覺行為的影響，及脊髓中磷酸化Akt（p-Akt）表達(dá)的變化；探討Akt信號(hào)通路在骨癌痛大鼠痛覺過敏產(chǎn)生中的作用及其脊髓機(jī)理。
　　方法實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)部分：
　　一．建立癌痛動(dòng)物模型
　　1.癌痛動(dòng)物模型的建立
　　將90只大鼠隨機(jī)（采用隨機(jī)數(shù)字表法）分為3組：癌痛模型組(A組60

2、只)、假手術(shù)組(B組10只)、正常組(C組20只)。其中A組大鼠左側(cè)脛骨髓腔內(nèi)注入20μl Walker256細(xì)胞(1×108/ml)，B組大鼠左側(cè)脛骨髓腔內(nèi)注入20μl生理鹽水，其余操作同A組，C組做不給藥處理。
　　2.評(píng)估癌痛動(dòng)物模型，再分組
　　造模后第7天，根據(jù)大鼠一般情況（生長(zhǎng)情況，體重變化）、行為學(xué)表現(xiàn)及影像學(xué)評(píng)估癌痛組大鼠造模是否成功，第7天從造模所有60只大鼠中篩選出30只。二．鞘內(nèi)注射Akt抑制劑GSK6

3、90693對(duì)骨癌痛大鼠行為學(xué)的影響
　　1.再分組：實(shí)驗(yàn)開始第7天，A組成模的30只大鼠隨機(jī)分為3組：癌痛組（A1組）、癌痛+NS組（A2組）、癌痛+抑制劑組（A3組），n=10。將正常組（C組）隨機(jī)分為2組：空白對(duì)照組（C1組）、空白+抑制劑組（C2），n=10。A3組和C2組分別在第13、14、21鞘內(nèi)注射Akt抑制劑GSK690693，A2組在第13、14、21鞘內(nèi)注射等量生理鹽水，A1組、B組、C1組均做不給藥處理。

4、>　　2.在第0、7、14、21天，觀察大鼠一般情況，記錄大鼠體重，分別檢測(cè)大鼠機(jī)械性縮足閾值（mechanical withdrawal threshold,MWT）和熱縮腿潛伏期（thermal withdrawal latency,TWL），統(tǒng)計(jì)分析大鼠的體重變化、MWT、TWL。
　　三．鞘內(nèi)注射Akt抑制劑GSK690693對(duì)骨癌痛大鼠脊髓p-Akt表達(dá)的影響
　　1.免疫組化方法檢測(cè)脊髓p-Akt水平
　　

5、建模后第21天取大鼠脊髓L4-L6區(qū)段，采用免疫組化染色法觀察脊髓中p-Akt的表達(dá)情況。
　　2．Western blot方法檢測(cè)脊髓p-Akt水平
　　建模后第21天取大鼠脊髓L4-6區(qū)段，采用Western blot半定量檢測(cè)脊髓中p-Akt的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠的疼痛行為學(xué)表現(xiàn)、影像學(xué)X線平片、脛骨組織學(xué)觀察結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)成功建立Walker256大鼠乳腺癌脛骨癌痛模型。
　　2.

6、造模手術(shù)所致創(chuàng)傷影響大鼠生長(zhǎng)，創(chuàng)傷修復(fù)后又能恢復(fù)正常。鞘內(nèi)注射生理鹽水對(duì)大鼠生長(zhǎng)無(wú)明顯影響；癌痛模型組鞘內(nèi)注射抑制劑后大鼠體重?zé)o逆轉(zhuǎn)趨勢(shì)，提示腫瘤影響大鼠生長(zhǎng)，鞘內(nèi)注射抑制劑對(duì)大鼠生長(zhǎng)無(wú)明顯影響，不能改善大鼠的一般情況。
　　3.手術(shù)創(chuàng)傷影響大鼠MWT數(shù)值，誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生痛覺過敏，創(chuàng)傷修復(fù)后又能恢復(fù)正常；鞘內(nèi)注射生理鹽水對(duì)大鼠MWT無(wú)明顯影響，不能改變大鼠機(jī)械痛覺敏感性；GSK690693可以抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)Akt信號(hào)通路，抑制癌痛

7、，降低機(jī)械痛覺過敏，改善疼痛。
　　4.手術(shù)創(chuàng)傷影響大鼠TWL數(shù)值，誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生痛覺過敏，待創(chuàng)傷修復(fù)后,TWL數(shù)值逐漸升高，趨于正常；鞘內(nèi)注射生理鹽水對(duì)大鼠TWL無(wú)明顯影響，不能改變大鼠熱痛覺敏感性；GSK690693可以抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)Akt信號(hào)通路，抑制癌痛，降低熱痛覺過敏，改善大鼠疼痛。
　　5.鞘內(nèi)注射GSK690693對(duì)大鼠骨質(zhì)結(jié)構(gòu)改變無(wú)明顯影響，不能逆轉(zhuǎn)大鼠骨質(zhì)破壞。
　　6.Walker256乳腺癌脛骨癌

8、痛模型大鼠脊髓p-Akt水平明顯升高，鞘內(nèi)注射Akt抑制劑GSK690693后，脊髓中的p-Akt水平降低。
　　結(jié)論：
　　1.運(yùn)用Walker256乳腺癌細(xì)胞可以成功建立大鼠脛骨癌痛模型。
　　2.腫瘤影響大鼠生長(zhǎng)，鞘內(nèi)注射Akt抑制劑GSK690693對(duì)大鼠生長(zhǎng)無(wú)明顯影響，不能改善大鼠的一般情況。
　　3. GSK690693可以抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)Akt信號(hào)通路，抑制癌痛，降低骨癌痛大鼠的機(jī)械縮足閾值，降低熱