CD44v17與宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)、宮頸癌的關(guān)系及CD44v17在CIN向?qū)m頸癌進(jìn)展中的作用.pdf

1、目的:通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)和臨床組織研究一種新的CD44變異體(CD44v17)與宮頸上皮內(nèi)瘤變（宮頸癌癌前病變）及宮頸癌之間的關(guān)系，以及其在宮頸上皮內(nèi)瘤變向?qū)m頸癌發(fā)生、發(fā)展中的表達(dá)和意義。
　　方法:用lipofectamine2000將CD44v17siRNA、pcDNA3.1-CD44v17質(zhì)粒及其陰性對(duì)照組轉(zhuǎn)染Hale細(xì)胞、Siha細(xì)胞，通過(guò)CCK-8、劃痕實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、Westernblotting、細(xì)胞周期測(cè)定方法等

2、觀察CD44v17對(duì)人宮頸癌細(xì)胞系Hale細(xì)胞及Siha細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移等能力的影響;建立荷人宮頸癌裸鼠移植瘤模型，在荷瘤裸鼠體內(nèi)注射針對(duì)CD44v17的shRNA慢病毒液，在體內(nèi)研究觀察靶向CD44v17的shRNA慢病毒對(duì)裸鼠宮頸癌移植瘤的成瘤情況;PCR檢測(cè)宮頸正常組織、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)和宮頸癌組織中CD44v17的含量;通過(guò)對(duì)比研究正常宮頸組織、各級(jí)宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和宮頸癌組織的CD44v17的表達(dá)，及

3、用RNA干擾技術(shù)探討CD44v17和MMP9、Ki67在宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變中的意義。
　　結(jié)果:CCK-8法證實(shí)CD44v17促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng);劃痕實(shí)驗(yàn)顯示CD44v17可增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞的遷移能力;流式細(xì)胞術(shù)及Western blotting檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白驗(yàn)證了CD44v17具有抑制宮頸癌細(xì)胞凋亡作用;細(xì)胞周期測(cè)定顯示干擾CD44v17RNA后，S期細(xì)胞比例降低，G1期細(xì)胞增高，細(xì)胞阻滯于G1期并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。裸鼠試驗(yàn)結(jié)

4、果顯示在荷瘤裸鼠體內(nèi)注射針對(duì)CD44v17的shRNA慢病毒液，干擾CD44v17 RNA后荷瘤裸鼠的成瘤能力明顯降低，成瘤的體積和重量均明顯降低。CD44v17、MMP9、Ki67的表達(dá)在宮頸正常組織、逐級(jí)升高的宮頸上皮內(nèi)瘤變組織、宮頸癌組織中逐漸升高，且CD44v17、MMP9、Ki67表達(dá)的增高幅度在CINⅢ級(jí)和宮頸癌間最明顯。
　　結(jié)論:CD44v17能抑制宮頸癌細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移