HCCR在宮頸癌和宮頸上皮內瘤變中的表達及其與HPV16-18感染的關系.pdf

1、宮頸癌(CC)是婦女最常見的惡性腫瘤之一，現(xiàn)已確認高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)是宮頸癌形成最重要的危險因子，99.7％的浸潤性宮頸癌中可以檢測到HR-HPV的存在。因此，通過高危HPV的檢測來篩查易患人群，追蹤HPV感染狀態(tài)，隨訪HPV是否被清除，是預防宮頸癌發(fā)生的關鍵。但并非所有感染HPV的患者都會發(fā)展為宮頸癌，僅檢測到患者感染了HPV而不進一步檢查就無法了解宮頸病變的程度和發(fā)展趨勢。人宮頸癌基因(HCCR，包括HCCR-1和H

2、CCR-2兩種)在宮頸上皮內瘤變(CIN)和宮頸癌中呈高表達，在正常對照組不表達，因此如果通過對宮頸癌病因學因素HPV和生物標志物因素HCCR的聯(lián)合檢測，來對宮頸癌高危人群進行篩查，可能具有重要意義。本研究對41例宮頸液基細胞殘液及相應的組織學標本應用原位雜交法檢測HPV16/18，并用免疫組化法檢測HCCR，以探討二者在子宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的生物學意義及臨床應用價值，試圖為提高宮頸癌易患人群檢出率，進而為宮頸癌的預警和早期診斷提供更科學

3、有效的方法，達到早診早治，降低宮頸癌發(fā)病率死亡率的目的：并為開發(fā)簡便易得的分子篩查技術資源提供理論基礎。 材料和方法: 1、材料 (1)研究對象 570例宮頸液基細胞學殘液標本，均經LCT(Liquid-based Cytology Test，LCT系統(tǒng))診為宮頸上皮內瘤變及宮頸癌，來自2005年11月～2006年11月中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院婦科。年齡19～76歲，平均48.53歲。無宮頸手術史、未孕、

4、無盆腔放射治療史。本研究組取其中經活檢或切除后具有相應組織學標本者31例，并隨機選取6例炎癥和4例正常標本作為對照，年齡25～68歲，平均年齡46.7歲。其中宮頸癌組6例、CINⅡ/Ⅲ組14例、CINI組11例、炎癥組6例(包括形態(tài)學診為HPV感染和炎癥的病例)、正常對照組4例。細胞學分組以相應組織學診斷為分組依據(jù)。 (2)主要試劑、儀器和來源HPV原位雜交試劑盒購自福州邁新生物技術有限公司。HCCR蛋白兔抗人多克隆抗體由韓國J

5、in Woo Kim教授惠贈(本抗體是針對HCCR-1和HCCR-2相同C-末端氨基酸序列的多克隆抗體，具有較好的特異性)。DAB顯色試劑盒和免疫組化S-P試劑盒購自福州邁新生物技術有限公司。 2、方法 (1)免疫組織化學染色：用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法(S-P法)檢測HCCR的表達。結果判定：HCCR蛋白定位于胞漿，胞漿內見棕黃色顆粒為陽性。由3名有經驗的病理醫(yī)師在雙盲法下獨立計數(shù)。細胞涂片主要計數(shù)有病

6、變的細胞，異常宮頸上皮細胞著色大于10％則判定為陽性標本<'[5]>。細胞片和組織片在光鏡下根據(jù)著色范圍分為：陽性細胞數(shù)小于10～24％為(+)；陽性細胞數(shù)25～49％為(++)；陽性細胞數(shù)50～74％為(+++)；陽性細胞數(shù)大于75％為(++++)。 (2)原位雜交：檢測HPVl6/18 DNA的表達。細胞核內出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。陽性細胞數(shù)小于25％為(+)；陽性細胞數(shù)25％～49％為(++)；陽性細胞數(shù)50％～74％為(+

7、++)；陽性細胞數(shù)75％～100％為(++++)。 (3)統(tǒng)計學分析：對所得結果各組間采用x<'2>檢驗及Fisher's確切概率法檢驗，P<0.05有統(tǒng)計學意義；用Spearman等級相關分析檢驗：HPV16/18感染與HCCR表達的關系，P<0.05有統(tǒng)計學意義。 結論: 1、HCCR和HPV16/18在宮頸上皮內瘤變及宮頸癌中，隨著病變程度的加重而檢出率增高。 2、HCCR的表達和HPV16/18的