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文檔簡介
1、目的:子宮頸癌是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一,是女性第二大致死性疾病,發(fā)病率呈年輕化和不斷上升趨勢。全世界每年約有50萬新發(fā)病例,僅次于乳腺癌。大多數(shù)宮頸癌是由癌前病變——子宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical Intraepithelial neoplasia,CIN)逐步發(fā)展形成的,早期診治可以有效避免病變的進展和轉化。對有些癌前病變,因受觀察者主觀因素的影響,難以做出準確診斷。因此,尋找用于宮頸癌前病變的輔助診斷,十分重要。
2、 目前普遍認為宮頸癌變與高危型人類乳頭狀瘤病毒16/18型(HPV16/18型)的持續(xù)感染密切相關。HPV的致癌過程常伴有原癌基因的突變或抑癌基因的失活,p16基因又稱多腫瘤抑制基因(multipie tumor suppressor,MTS1),它是人們發(fā)現(xiàn)的第一個直接作用于細胞周期,抑制細胞分裂的基因。以往研究證實,在子宮頸癌發(fā)生過程中存在P16蛋白表達異常,但其表達是升高,還是降低說法不一;近年來,P16與宮頸癌的關系已有較
3、多研究,但對于P16蛋白表達在CIN組織病理學診斷和分級中的作用及意義尚未明確。
本課題通過自制組織芯片檢測正常宮頸鱗狀上皮、CIN、宮頸鱗癌中P16蛋白的表達及HPV16/18感染的情況,研究病毒感染在子宮頸癌變過程中的作用;觀察P16蛋白在不同病變中的表達,探討P16蛋白過表達在宮頸癌變中的意義;研究宮頸鱗癌及CIN組織中HPV感染與P16蛋白表達的密切關系,分析HPV16/18感染對P16蛋白表達的影響,從而為臨床尋
4、找更為客觀可靠的指標用以監(jiān)測病變的進展,以及為進一步揭示HPV致癌機制及協(xié)同作用因素提供依據(jù),對子宮頸癌的早期預防、早期發(fā)現(xiàn)、早期治療有重要的現(xiàn)實意義。
方法:
1 收集子宮頸組織標本168例,其中宮頸鱗癌44例,CIN96例,正常宮頸28例。
2 應用自制組織芯片技術將168例供體標本,按陣列設計順序依次放入受體蠟塊中,融合、切片、撈片、烤片制成需要的組織芯片。
3 應用免疫組織
5、化學技術(SP法)測定宮頸鱗癌、CIN、正常宮頸鱗狀上皮組織中P16表達。
4 采用原位雜交技術檢測 HPV-DNA16/18在宮頸鱗癌、CIN及正常宮頸鱗狀上皮組織中的表達情況。
5 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件,計數(shù)資料進行X2檢驗、等級資料采用非參數(shù)秩和檢驗、相關性采用Spearman秩相關分析。以α=0.05為檢驗水準,當P<0.05時具有統(tǒng)計學意義。
結果:
1、組織芯片
6、制備
按課題需要制作7×5,6×5芯片共5張,組織點陣排列整齊,無點陣移位現(xiàn)象,有11個位點缺失或組織無意義,其他位點均可見足夠的組織結構。組織位點的形態(tài)可觀測率在90%以上。
HE染色均勻,無脫片、異位和皺折。免疫組織化學染色及原位雜交,陽性定位清楚,背景干凈,無掉片現(xiàn)象。
2、P16在宮頸上皮不同病變中的表達
采用免疫組織化學方法檢測41例宮頸鱗癌、90例CIN及28例正常宮頸
7、鱗狀上皮組織中P16的表達。正常宮頸鱗狀上皮中P16缺乏表達,病變組織中P16的表達有明顯的分層現(xiàn)象,低級別的CIN中陽性細胞主要局限于中下層,而高級別的CIN則可超過上皮層的下2/3或達全層。P16陽性表達率:宮頸鱗癌100%(41/41),CINⅢ級96.67%(29/30)、CINⅡ級96.30%(26/27)、CINⅠ級42.42%(14/33)。P16在正常宮頸、各級別CIN及宮頸鱗癌中的陽性表達強度之間比較,結果有統(tǒng)計學意義
8、(P<0.05),且隨著病變程度的增加,陽性表達以過表達即中度陽性(++)~強陽性(+++)為主。在正常宮頸和CINⅠ級,CINⅠ級與CINⅡ級之間,P16陽性表達率比較,結果有統(tǒng)計學意義(P<0.05);CINⅡ級與CINⅢ級及CINⅢ級與宮頸鱗癌之間,均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
3、HPV-DNA16/18在宮頸上皮不同病變中的表達
采用原位雜交技術檢測HPV-DNA16/18在41例宮頸鱗癌、90
9、例CIN(包括30例CINⅢ,27例CINⅡ,33例CINⅠ)及28例正常宮頸鱗狀上皮組織中的表達。正常宮頸鱗狀上皮中HPV-DNA無表達,從CINⅠ到宮頸鱗癌,HPV-DNA的表達情況依次為15.2%(5/33)、44.4%(12/27)、60%(18/30)、53.7%(22/41),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。HPV-DNA陽性率在CIN病變及宮頸鱗癌中明顯高于正常宮頸鱗狀上皮(P<0.05),但在CINⅡ級與CINⅢ級、C
10、INⅢ級和宮頸鱗癌之間,HPV-DNA表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
4、子宮頸病變中P16表達與HPV16/18感染的相關性分析子宮頸病變中HPV16/18陽性率越高,P16蛋白表達的程度越高,呈正相關(r=0.36,P<0.05)。
結論:
1、免疫組化方法標記P16蛋白,在各級別CIN及宮頸鱗癌中其陽性表達率(+~+++)均高于正常宮頸組織,可協(xié)助鑒別正常宮頸鱗狀上皮與發(fā)生病變的鱗
11、狀上皮。
2、免疫組化方法標記P16蛋白,從正常宮頸鱗狀上皮到宮頸鱗癌,隨著病變程度的增加,中度陽性~強陽性(++~+++)表達逐漸增多,其陽性程度可協(xié)助判定病變程度。
3、免疫組化方法標記P16蛋白,正常宮頸鱗狀上皮中P16缺乏表達,P16的表達有明顯的分層現(xiàn)象,低級別的CIN中陽性細胞主要局限于中下層,而高級別的CIN則可超過上皮層的下2/3或達全層,有助于CIN級別的判定。
4、原位雜交技
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