不同濃度柚皮苷仿生涂層在鈦表面的構(gòu)建及生物學(xué)評價.pdf

1、目的:
　　將不同濃度的柚皮苷以層層自組裝的方法構(gòu)建純鈦表面仿生涂層，研究組裝了柚皮苷仿生涂層的純鈦片對體外培養(yǎng)的小鼠前骨細(xì)胞MC3T3-E1增殖和分化的影響，探索柚皮苷濃度以及培養(yǎng)時間對MC3T3-E1細(xì)胞的作用。
　　方法:
　　1、用金相砂紙分別按320目、800目、1200目、2000目逐級仔細(xì)打磨直徑10mm、厚度1mm的圓形純鈦片，打磨完成的鈦片表面光滑呈亮白色。按去離子水→無水乙醇→丙酮→去離子水的順序依

2、次超聲清洗鈦片各15分鐘，高溫高壓消毒。用冷卻至室溫的混合酸溶液（等體積的98％H2SO4與30％H2O2混合所得）對鈦片酸蝕1h，以大量的去離子水反復(fù)沖洗鈦片至鈦片表面呈中性，烘干后置于培養(yǎng)皿中，保鮮膜封存待用。
　　2、將柚皮苷溶解于透明質(zhì)酸溶液中，配置成不同濃度柚皮苷溶液:10-4mol/L組;10-5mol/L組;10-6mol/L組和10-7mol/L組，本實驗還設(shè)有未加藥的涂層組（簡稱未加藥組）以及未制備涂層的酸蝕鈦片

3、組（簡稱空白組）。
　　3、將MC3T3-E1細(xì)胞分別接種在各濃度柚皮苷組、未加藥組及空白組培養(yǎng)24h、48h和72h后，采用CCK8法，檢測各組在相應(yīng)的時間檢測點(diǎn)450nm波長時的吸光度值，評價柚皮苷涂層對MC3T3-E1增殖的影響。
　　4、將MC3T3-E1細(xì)胞分別接種在各濃度柚皮苷組、未加藥組及空白組培養(yǎng)96h后，裂解細(xì)胞，采用堿性磷酸酶(ALP)試劑盒測定各實驗組細(xì)胞的ALP活性，評價不同濃度柚皮苷涂層對MC3T3

4、-E1細(xì)胞分化的影響。
　　5、將MC3T3-E1細(xì)胞分別接種在各濃度柚皮苷組、未加藥組及空白組培養(yǎng)96h后，提取總RNA，采用實時熒光定量PCR法，檢測MC3T3-E1細(xì)胞生長于各實驗組鈦片后OC mRNA，Runx2 mRNA及Colla1 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、各濃度柚皮苷涂層組在24h，48h和72h對MC3T3-E1細(xì)胞促增殖的作用強(qiáng)于未加藥組和空白組(P＜0.01)，且隨著時間增加，促增殖作

5、用越明顯，相同時間檢測點(diǎn)下在10-6mol/L時作用效果最好。
　　2、各濃度柚皮苷涂層組在96h對MC3T3-E1細(xì)胞ALP活性檢測結(jié)果均高于于未加藥組和空白組，其中在濃度10-4mol/L、10-6mol/L時作用效果較好，但不同濃度之間對細(xì)胞的作用差異不大。
　　3、各濃度柚皮苷涂層組在96h對MC3T3-E1細(xì)胞Runx2mRNA及Colla1mRNA表達(dá)的作用均強(qiáng)于未加藥組和空白組，其中10-6mol/L濃度下的柚