鈦表面抗菌仿生礦化涂層的制備與功能評價.pdf

1、目的:鈦作為生物醫(yī)用材料有著優(yōu)越的力學性能,如較低的彈性模量、較高的力學強度、良好的生物相容性和抗腐蝕性等。但鈦暴露于空氣中會形成(3-7nm)生物惰性氧化層,從而使單純的鈦植入體植入后產生炎癥導致種植的失敗。本實驗通過堿熱處理結合仿生礦化的方法在鈦表面構建一層均勻的礦化層,然后采用物理吸附的方式將人工合成抗菌肽(pac-525)固定在此礦化層表面,再在此表面電噴一層載pac-525的PLGA微球,通過這樣的處理使得鈦表面具有骨傳導和骨

2、誘導活性的同時具有抗菌性。
　　方法:1.鈦表面抗菌活性的仿生礦化涂層
　　鈦表面通過堿熱處理及仿生礦化的方法制備仿生礦化層,并物理吸附人工合成抗菌肽pac-525,在空氣中干燥。在礦化表面使用乳化電噴的方法噴涂一層包裹pac-525的PLGA微球。
　　2.礦化涂層物相組成及形貌觀察
　　X射線衍射(XRD)分析礦化涂層物相組成,掃描電子顯微鏡(SEM)來觀察微球的表面形貌,激光共聚焦顯微鏡觀察pac-525在

3、樣品表面的分布情況。
　　3.樣品中抗菌肽的緩釋
　　用乙腈溶液和0.1mol的鹽酸溶液溶解樣品表面的pac-525,然后通過多功能酶標儀測量樣品的載藥情況及固定時間節(jié)點樣品緩釋出的pac-525濃度。
　　4.樣品表面細胞粘附、增殖及細胞毒性測試
　　樣品表面培養(yǎng)MC3T3-E1細胞,掃描電鏡(SEM)及激光共聚焦顯微鏡觀察細胞在6小時的貼附情況,及1、3、5天細胞的增殖情況。CCK-8試劑盒來檢測樣品對細胞的

4、毒性測試。
　　5.樣品抗菌檢測
　　樣品表面分別培養(yǎng)革蘭陰性菌大腸桿菌和革蘭陽性菌金黃色葡萄球菌,24小時后觀察樣品周圍形成的抑菌環(huán),并使用掃描電鏡觀察樣品表面細菌粘附的情況。
　　結果:1.XRD檢測鈦表面仿生礦化涂層的物相組成是羥基磷灰石,SEM觀察到礦化表面均勻的片狀結構,電噴的PLGA微球鑲嵌在礦化涂層表面,直徑大約在5-10μ m。激光共聚焦顯示樣品表面有抗菌肽pac-525的分布。
　　2.樣品的緩

5、釋測試顯示,在最初的幾個小時有突釋的現象,之后以一個平緩的速度釋放。
　　3.細胞在鈦抗菌仿生礦化涂層表面貼附六小時后,采用掃描電鏡和激光共聚焦顯微鏡對細胞貼附情況進行觀察,結果顯示礦化涂層表面的細胞同對照組一樣廣泛地在樣品表面呈多邊形伸展并有大量的細胞偽足。增殖實驗顯示MC3T3-E1細胞在樣品上正常的增殖。使用CCK-8法評估樣品細胞毒性,方差統(tǒng)計分析表明鈦抗菌仿生礦化涂層和對照（純鈦和未載藥的樣品表面培養(yǎng)的細胞）間沒有顯著差