淫羊藿總黃酮延緩秀麗線蟲衰老的實驗研究.pdf

1、[背景]中國已經(jīng)跨入老齡化社會。衰老以及衰老相關疾病成為日趨嚴重的醫(yī)學問題和社會難題。闡明衰老機制、干預衰老進程具有重要的現(xiàn)實意義。中醫(yī)藥學對于延緩衰老有著深刻的理論闡述和豐富的實踐經(jīng)驗,其中“補腎延緩衰老”占主要地位。本課題組在腎虛證研究的過程中,已經(jīng)揭示淫羊藿總黃酮(EF)是補腎方及單味中藥淫羊藿延緩衰老的主要藥效成分。為評價EF延緩衰老的效果并探索其作用機制,引進國際上衰老研究領域的主要模式生物秀麗線蟲(Caenorhabditi

2、s elegans,C.elegans)進行研究。秀麗線蟲生命周期短,可重復大樣本壽命實驗,并且與其壽命相關的遺傳和環(huán)境背景較清晰,非常適合進行衰老干預效果的評價和機制研究。在秀麗線蟲上進行的壽命分析實驗、生殖能力測試和壓力應激測試所得之指標可構成簡單的藥物干預衰老評價系統(tǒng),并可對藥物作用機制進行初步探索。
　　 [目的]通過秀麗線蟲評價EF延緩衰老的作用并初步探討EF作用機制。
　　 [方法]
　　 1.藥物濃

3、度-效果檢測:動物分為EF0mg/L(正常對照組)、25mg/L、50mg/L、100mg/L,組進行壽命實驗以選出EF作用的有效劑量。
　　 2.壽命分析實驗:動物分為正常對照組、CR組(陽性對照)、EF最佳劑量組(以下簡稱EF組)進行壽命實驗,并對正常對照組及EF組的生存曲線進行動力學分析,評價EF延長線蟲壽命的效果。
　　 3.生殖能力測試:動物分為正常對照組及EF組,進行生殖能力測試,檢測EF是否在延長線蟲壽命的

4、同時影響其生殖能力。
　　 4.壓力應激實驗:動物分為正常對照組及EF組,進行急性熱應激實驗、急性氧化應激實驗,佐證壽命實驗同時檢測EF是否通過提高線蟲壓力應激能力延長線蟲壽命。
　　 [結果]
　　 1.EF濃度-效果檢測:①平均壽命(單位天):0mg/L組20.48±5.52(n=50),25mg/L組23.73±4.75(n=52),50mg/L組29.04±6.39(n=56),100mg/L組22.55

5、±4.49(n=58)。②最大壽命(單位天):0mg/L組30.8±1.1(n=5),25mg/L組32±2(n=5),50mg/L組41.67±2.9(n=6),100mg/L組30.7±1(n=6)。25mg/L、50mg/L、100mg/L組的平均壽命均長于正常組,以50mg/L組最為顯著；僅50mg/L組的最大壽命長于正常組。
　　 2.壽命分析實驗:①平均壽命(單位天):正常對照組20.48±5.52(n=50),CR

6、組26.52±5.08(n=50),EF組29.04±6.39(n=56)。②最大壽命(單位天):正常對照組30.8±1.1(n=5),CR組36±2(n=5),EF組41.67±2.9(n=6)。EF組的平均壽命和最大壽命均長于CR組。對正常組及EF組的生存曲線進行動力分析顯示,EF能推遲線蟲進入死亡期,降低年齡特異死亡率。
　　 3.生殖能力測試:①產(chǎn)卵總數(shù):正常對照組211.9±38.73(n=10),EF組198.8±4

7、2.5(n=13),兩組相比無統(tǒng)計學意義。②生殖峰期(性成熟后第2和第3天)產(chǎn)卵數(shù):正常對照組120±23.24(n=10),EF組149±22.67(n=13),EF組產(chǎn)卵數(shù)量多于正常組。
　　 4.壓力應激實驗:①急性熱應激實驗中線蟲平均生存時間(單位小時):正常對照組6.71±1.3(n=19),EF組8.93±1.6(n=21),EF組存活時間長于正常組。②急性氧化應激實驗中線蟲平均生存時間(單位小時):正常對照組6.9