PRRSV四種受體在萊蕪黑豬主要組織中的相對(duì)表達(dá)量檢測(cè).pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus，PRRSV)引起的，以母豬繁殖障礙（流產(chǎn)、死產(chǎn)、弱胎、木乃伊胎）以及仔豬的呼吸道癥狀和高死亡率為主要特征的一種新型傳染病。該病1987年首次在美國(guó)發(fā)生，1990年首次在荷蘭從肺泡巨噬細(xì)胞

2、中分離到病原，之后在德國(guó)、西班牙、英國(guó)、法國(guó)、丹麥等國(guó)家也先后報(bào)道發(fā)生該病。1996年郭寶清等人用間接免疫熒光法首次證實(shí)本病在國(guó)內(nèi)存在。PRSSV有2個(gè)血清型，美洲型和歐洲型，我國(guó)爆發(fā)的主要以美洲型為主。
　　 為了檢測(cè)地方品種豬對(duì)PRRSV的耐受性及病毒在體內(nèi)的增殖規(guī)律，15頭經(jīng)RT-PCR檢測(cè)為PRRSV抗原陰性和ELISA檢測(cè)為PRRSV抗體陰性的30日齡健康萊蕪黑豬仔豬，隨機(jī)分為2組，攻毒組10頭，對(duì)照組5頭，分別人工鼻

3、腔接種1mL/頭(104TCID50/mL) PRRSV液和PBS。分別于感染后觀察攻毒豬的臨床癥狀，并于第3d、7d、14d、21d、28d剖殺對(duì)照組1頭、攻毒組2頭試驗(yàn)豬，觀察攻毒豬病理變化，采集心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、扁桃體、下頜淋巴結(jié)、腹股溝淋巴結(jié)和腸系膜淋巴結(jié)并立即放入液氮中，-80℃保存。
　　 為檢測(cè)PRRSV在萊蕪黑豬體內(nèi)的增殖規(guī)律，本研究合成了TaqMan探針，并建立了檢測(cè)PRRSV的絕對(duì)定量PCR方法，

4、得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=-3.1843x+39.241867，相關(guān)系數(shù)R2=0.99，該方法特異性和重復(fù)性好，靈敏度高，最低可檢測(cè)到10拷貝數(shù)的病毒，比普通PCR方法高10倍～100倍。應(yīng)用建立的熒光定量RT-PCR方法對(duì)各組織中病毒進(jìn)行定量。結(jié)果表明，對(duì)照組萊蕪黑豬PRRSV呈陰性，感染組PRRSV均呈陽(yáng)性。PRRSV攻毒后第3d感染組豬的各組織中均檢測(cè)到低拷貝病毒核酸存在，攻毒后7～21d，各種組織中的病毒載量維持在較高水平，而攻毒后

5、第28d時(shí)，多數(shù)組織中的PRRSV病毒含量明顯下降。扁桃體及各種淋巴結(jié)中的病毒載量要明顯高于其他臟器，顯示PRRSV在感染萊蕪黑豬后對(duì)淋巴組織具有組織嗜性。
　　 建立檢測(cè)PRRSV的四種受體（包括五號(hào)受體、唾液酸黏附素受體、CD163受體和波形蛋白受體）的相對(duì)熒光定量RT-PCR方法。應(yīng)用建立的熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)攻毒后3d、7d、14d、21d、28d萊蕪黑豬各組織中PRRSV的上述四種受體相對(duì)表達(dá)量變化情況。結(jié)果發(fā)